成年小鼠心脏单个细胞悬液的制备及流式细胞检测(3)
3 讨论本研究结果显示,经过剪碎心脏及消化酶的消化作用可制备心脏单个細胞悬液。获得的心脏单个细胞悬液通过抗体标记,进行流式细胞分析,RI 24 h组CD45阳性细胞占心肌细胞比例高于假手术组(P<0.05);RI 24 h组CD11c+Ly6C+树突状细胞占CD45阳性细胞的比例高于假手术组(P<0.05)。RI 24 h组CD11c标记的树突状细胞(CD11c+Ly6C-、CD11c+Ly6C+)及Ly6C标记的单核细胞(CD11c+Ly6C+、CD11c-Ly6C+)等各亚群细胞在总心肌细胞中的比例均高于假手术组(P<0.05),其中双阳性细胞(CD11c+Ly6C+)升高最为突出。对于心脏的免疫炎症研究来说,通过制备小鼠心脏单个细胞悬液,树突状细胞、单核细胞等炎症细胞的定量和详细抗体标记分析是可实现的。
心肌消化既往主要采集乳鼠(1~3 d的SD大鼠)的心脏,分离心肌细胞或成纤维细胞进行细胞培养,使用的消化液主要含有胰蛋白酶、Collagenase Ⅰ,对剪碎的心脏组织块进行消化。胰蛋白酶主要用于分解组织间质的蛋白质 ......
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