3 讨论

    3.1 体外兔肌腱成纤维细胞的原代培养 本实验中新西兰大白兔前肢趾伸肌腱的成纤维细胞培养为原代培养，选取了相对胰酶消化法较为简便的组织块法培养。但应注意以下几点：(1)剪切肌腱组织块时严格掌握时间，应尽量在短时间内完成，同时应注意保持组织块的湿润，可在PBS磷酸盐缓冲液中进行。(2)密切关注组织块的贴壁情况，组织块贴壁上之后方为培养液加入的最佳时机。培养初期应尽量避免培养瓶的移动，建议首次换液在3 d后进行，可有效避免干扰组织块的贴壁。(3)注意全程无菌操作，因为培养失败的首要原因主要是污染，其中以微生物污染最为常见。一旦发现污染，应弃之并重新培养。

    3.2 天然水蛭素对兔肌腱成纤维细胞的抑制作用 MTT实验研究发现不同浓度天然水蛭素与兔肌腱成纤维细胞作用48 h后，细胞生长抑制作用呈现浓度依赖性。天然水蛭素浓度为0 U/mL时，肌腱成纤维细胞具有较强的生命力；随着天然水蛭素浓度不断增加(1～10 U/mL)，此时成纤维细胞的数量下降，呈现明显的抑制作用。这为后期临床天然水蛭素剂量的配置提供一定的依据。

    为了进一步评价不同浓度天然水蛭素对肌腱成纤维细胞的抑制作用，本实验采用双抗体夹心ELISA法检测各组标本的TGF-β1、bFGF和MMP-2表达含量 ......