TET2蛋白下调5hmC在膀胱癌细胞T739中低表达(2)
1 材料与方法1.1 细胞来源及培养 人类膀胱癌细胞株T739、人膀胱上皮细胞株T24由中科院上海细胞库提供。RPMI 1640细胞培养液购自Hyclone公司,10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素购自Invitrogen公司。细胞置于培养皿中,放到37 ℃的条件下,5%CO2培养箱中传代培养。最终,取对数生长期的细胞进行本研究的相关实验操作。
1.2 RNA提取、反转录聚合酶链反应 Real-time PCR检测T739和T24细胞中TET2 mRNA的表达,利用TRIzol试剂(Invitrogen公司)分别提取T739与T24细胞的总RNA,合成cDNA。反应条件:(1)42 ℃ 30 min;(2)99 ℃5 min,反应产物-20 ℃冰箱保存。采用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒,合成cDNA,进行real-time PCR反应。本研究中采用的TET2 mRNA的引物序列由上海生工生物工程公司合成:上游5’-TTCTTCCCCATGACCAC-3’下游5’-ACGCTTGGAAG CAGGAGAT-3’ ......
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