莫优炼 杨六成 胡小华 陈茂芳 段立锋 苏嘉鸿 张平锋钟陈 张家德 冯大军

    先天性巨结肠(Hirschsprung’s disease，HD)是小儿常见的先天性肠道疾病之一，发病是由于结肠神经节细胞缺乏引起肠管持续痉挛，进而粪便淤滞结肠近端，长期淤滞使该段结肠肥厚扩张[1-2]。HD临床上常表现为胎便排出障碍、患儿便秘腹胀及营养不良等，HD在很大程度上影响幼儿的生长发育，不利于其正常的学习与生活。本研究通过观察HD不同节段肠壁神经、平滑肌的分布特点，探究HD手术结肠切除范围及术后胃肠功能紊乱的原因，现报道如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2014年1月-2016年12月本院收治的手术切除的46例HD标本，设其为观察组。选取本院同期收治的死于与胃肠道疾病无关的同年龄段的25例患儿的结肠标本，将其设为对照组。(1)纳入标准：观察组参照文献[3]中HD的诊断标准，患儿有HD相关临床症状、经腹部平片和钡剂灌肠等影像学检查及肛门直肠侧压临床诊断为HD；术后病理诊断确诊为HD。两组患儿需有完整的病例资料；家属知情研究，并签署同意书。(2)排除标准：合并有其他肠道疾病、类源性巨结肠者；HD标本无法满足研究要求者。研究具体事项已上报相关部门，医院医学伦理委员会审核通过此研究。

    1.2 方法

    1.2.1 免疫组化法 存档蜡块，以肠管纵轴为固定方向，从远端到近端手术切除点每2厘米进行1次取材。(1)SP法：常规脱蜡，采用3%的H2O2在37 ℃条件下孵育10 min左右；之后进行抗原修复，修复时微波温度控制在92～98 ℃，时间为10 min，选择0.01 mol/L的枸橼酸缓冲液(pH=6.0)作为Syn、NCAM抗原修复液；运用正常羊血清工作液封闭，滴入稀释度均为1∶100的兔抗人Syn/NCAM单克隆抗体，4 ℃环境下孵育过夜，PBS缓冲液代替一抗起阴性对照作用。二抗选用抗兔SP试剂盒。DAB/H2O2染色，充分冲洗后再苏木素复染，常规脱水、干燥、封片。(2)苏木素-伊红染色：所有标本同时进行HE染色。

    1.3 观察指标 (1)记录两组肌间神经丛、丛内神经节细胞数量。(2)肌层厚度、厚度比：在HE染色后通过低倍镜观察，随机选取10个视野，借助测微尺对环、纵肌的厚度进行测量，并计算厚度比。每小格为10 μm。(3)肌层病变：对肌层的空泡变性程度分为四个等级，无(-)、少量(+)、中等量(++)、大量(+++)。(4)免疫组化染色(Syn、NCAM染色)：用于判断肠壁肌层中阳性着色的神经纤维分布情况 ......