Wnt-1/β-catenin通路在亚硒酸钠抑制人增生性瘢痕成纤维细胞体外增殖过程中表达研究
免疫组化,1材料与方法,2结果,3讨论
杨陆涛 张守忠 潘拥军 曾元临目前对生物体的演变和发展规律研究已经成为热点,而作为在调控细胞生长、发育和分化过程中起重要作用的Wnt/β-catenin信号通路也得到越来越多的研究。本课题主要研究亚硒酸钠对人增生性瘢痕(Hypertrophic scar,HS)成纤维细胞(Fibroblasts,FB)体外增殖的影响,前期研究已发现亚硒酸钠在体外可以抑制人HSFB的增殖,显示可以明显抑制FB中的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达[1-3]。还没有相关文献显示亚硒酸钠在抑制人HSFB增殖相关机制方面的报道,为了进一步明确亚硒酸钠对人HSFB抑制的分子机制,决定首先从Wnt-1/β-catenin信号通路在亚硒酸钠作用后的人HSFB中的变化方面研究入手,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 取自2016年1-3月在九江市第一人民医院烧伤整形科行HS整形手术的患者瘢痕组织(年龄4~12岁,3例患者的瘢痕组织,其身体健康、近期未使任何抗瘢痕药物、瘢痕组织处于稳定期且无恶变,瘢痕用于研究实验均征得患者家属的知情同意)。设置试验组与和对照组,试验组分为A、B、C、D、E组,每组3份标本,分别加入等量含2.5、5、10、20、40 μmol/L浓度的亚硒酸钠10%胎牛血清的培养基,对照组加入等量的10%胎牛血清培养基(即0 μmol/L浓度的亚硒酸钠)。
1.2 方法
1.2.1 主要试剂和仪器 亚硒酸钠粉末(Sigma,美国),DMEM(Hyclone,美国),胎牛血清(Hyclone,美 国 ), 胰 蛋 白 酶(Hyclone, 美 国 ),PBS液(Hyclone,美国),Wnt-1一抗(中杉金桥,北京),β-catenin(中杉金桥,北京),PV-9000试剂盒(中杉金桥,北京),DAB试剂盒(中杉金桥,北京);CO2恒温培养箱(Thermo-BB15,德国),台式离心机(Allegra,美国),超净工作台(苏干 ......
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