苦参素对肝癌细胞HepG2增殖及能量代谢的影响(2)
1.2 方法1.2.1 CCK-8检测OM作用HepG2细胞增殖的影响 分组:实验组(OM组)、阴性与空白对照组;取细胞悬液高倍细微镜计数细胞密度,将细胞密度为5 000个细胞/mL接种到96孔中,100 μL/孔。恒温培育至细胞贴壁,加入事先配置苦参素培养液,使其最终浓度为由0.5 mg/mL逐倍增加至8 mg/mL,每个浓度做5个复孔。继续培养24、48、72 h后,加入CCK-8试剂,10 μL/孔,继续培育4 h,置于酶标仪上测定450 nm处的吸光度。计算肿瘤细胞抑制率。
1.2.2 HPLC法研究OM对HepG2细胞能量代谢的影响 流动相:甲醇(99︰1)︰100 mmol/l磷酸盐缓冲液,柱温:30 ℃,进样量:20 μL,流速:0.6 mL/min,检测波长:254 nm。色谱柱:C18色谱柱(4.6×250 mm,粒径5 μm)。使用ATP标准品得出色谱图,同时应用回归方程建立标准曲线。
1.2.2.1 细胞培养 分组:实验组(1.0 mg/mL OM)及阴性对照组(加培养基);取对数生长期细胞1瓶进行细胞计数,接种到4孔板中 ......
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