1.4 实时荧光定量PCR 处理后的细胞提取RNA进行反转录和PCR。GAPDH为内参照物，BMP上游引物为5’-AGGAAGCAGTCTGTGTAGTGTG-3’，下游引物5’-GATGTAGTAGAGGGATGTGGG-3’；Smad1上游引物为5’-CTGCCCTCAGAAATCAACAGAG-3’，下游引物5’-GTGAAACCATCCACCAACACAC-3’；GAPDH上游引物为5’-CCCTTCA TTGACCTCAACTACATGG-3’，下游引物为5’-CATGGTGGTGAAGACGCCAG-3’。用2-ΔΔCt值分析各组细胞中BMP4、Smad1相对表达量。每组实验重复3次。

    1.5 蛋白印迹分析(Western blot) Western blot检测细胞BMP4和Smad1蛋白表达：以GAPDH为内参照物，将细胞裂解液加入至各组细胞中提取总蛋白，将蛋白溶液和上样缓冲液按2︰1混合均匀，于沸水浴中加热5 min ......