β—tubulinⅢ、ERCC—1在非小细胞肺癌中的表达和临床意义(2)
1.2 试剂 即用型β-tubulin抗体购自上海美吉生物公司,1∶200 ERCC-1抗体购自美国Amgen生物公司,Envision试剂盒购自美吉生物公司,兔抗人多克隆抗体购自美国Amgen生物公司。1.3 实验方法 检测β-tubulin Ⅲ、ERCC-1表达情况:采用免疫组化染色(Envision法)。石蜡切片脱蜡和水化后,用pH 7.4的PBS冲洗,3 min/次,共3次,使用微波炉修复组织抗原,每张切片上滴加
1滴或50 μL 3%H2O2溶液于室温孵育10 min,以阻断内源性过氧化物酶。PBS冲洗,3 min/次,共3次,甩去PBS液,每张切片上滴加1滴或50 μL的第一抗,于室温孵育60 min。PBS冲洗,3 min/次,共
5次,甩去PBS液,每张切片上滴加1滴或50 μL聚合物增强剂(试剂A),于室温孵育,20 min。PBS冲洗,3 min/次,共3次,甩去PBS液,每张切片加1滴或50 μL酶标抗鼠/兔聚合物(试剂B),在室温下孵育30 min,PBS冲洗,3 min/次,共3次,甩去PBS液 ......
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