实时荧光PCR探针法和DNA测序法应用于CYP2C9和VKORC1基因检测的对比研究(2)
1.3.2 將已加样的试剂条放置于试管架上放入核酸提取仪中,选取自动提取程序进行核酸提取。1.3.3 运行完毕后,用移液器吸取出核酸溶液合约350 μL,用NanoDrop 2000超微量紫外分光光度计进行DNA浓度及纯度分析,确保DNA含量>10 ng/μL,OD260/280在1.8~2.0。所提取的DNA当日使用,使用完毕后分装一管100 μL外送测序,剩余的DNA保存于-80 ℃备查。
1.4 实时荧光PCR检测
1.4.1 配置反应体系 管1和管2分别加入CYP2C9*3和VKORC1反应液各23 μL。
1.4.2 将待测样本DNA、弱阳性对照、空白对照2 μL分别加入已分装的2种反应管中,盖上管盖,编号后转移至PCR仪上检测。
1.4.3 PCR扩增检测 按37 ℃ 10 min UNG处理,95 ℃ 5 min预变性,然后按95 ℃ 15 s→62 ℃ 60 s40循环进行扩增;荧光通道设置为FAM、VIC ......
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