1.3.5 Western blot检测细胞中PCNA、Survivin、p21、p27及p-ERK1/2蛋白的表达 将8×103个HL-60细胞接种到6孔板，培养24 h后，用不同浓度(0、5、10、20 μmol/L)的U0126处理HL-60细胞48 h，在冰浴条件下将6孔板中细胞刮下来，离心收集细胞，并加入细胞裂解液，裂解30 min，离心获得的上清液即是总蛋白。接着利用BCA试剂盒测定蛋白浓度。蛋白煮沸10 min进行变性，上样，进行十二烷基苯磺酸钠凝胶电泳1～2 h，后湿法转膜30～50 min。5%脱脂奶粉封闭1 h，一抗溶液(兔抗人PCNA，Survivin，p21，p27，GAPDH单克隆抗体，稀释度为1︰100；兔抗人ERK1/2，p-ERK1/2多克隆抗，稀释度为1︰200)孵育，4 ℃过夜；二抗溶液室温孵育1～2 h。于凝胶成像系统中曝光。用“Quantity one”软件统计各抗体条带灰度值。

    1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用(x±s)表示，比较采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 U0126对HL-60细胞活力的影响 0、5、10、20 μmol/L的U0126作用HL-60细胞24、48、72 h后 ......