BIN1基因多态性与中国福建东南部地区阿尔茨海默病患者的关联研究(2)
2个或2个以上高年资神经内科专科医师进行。本研究通过厦门大学附属第一医院伦理委员会讨论批准,所有参与者均由本人或者代理人签署知情同意书。1.2 方法
1.2.1 APOE基因检测 采用血液基因组DNA提取试剂盒(Tiangen,China)提取参与者外周血基因组DNA。设计5条引物运用多重突变扩增系统检测APOE基因型[9],引物序列见表1。
1.2.2 BIN1基因多态位点检测 本研究采用Sanger测序方法检测BIN1基因rs7561528变异位点,引物由上海生工公司设计合成。实验步骤如下,(1)PCR反应:PCR反应为15 μL体系,包含10 μmol/μL的上下游引物、2×Taq Mix(Tiangen,China)、DNA模板和ddH2O。反应条件为94 ℃预变性2 min,30个循环的94 ℃变性30 s,62 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min,最后72 ℃再延伸5 min;(2)PCR产物纯化:将PCR产物置于PCR仪中,37 ℃反应60 min,85 ℃反应15 min;(3)测序反应:将纯化产物96 ℃预变性1 min ......
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