血清水通道蛋白4抗体检测在视神经脊髓炎患者中的应用价值(2)
1.2.3 血清AQP-4抗体检测方法 首先将人胚肾293(HEK293)细胞用175 cm2培养瓶进行培养，等到细胞贴合程度达到50%后应用PEI介导EGFP-AQP-4M23cDNA质粒对HEK293细胞进行转染[5]，转染率>70%后应用细胞裂解液对细胞进行裂解，后对其进行离心分取上清液，其中必然含有EGFP-AQP-4蛋白，对其进行荧光值(FU)测定，FU值保持在(500～600)/200 μL；对待测血清进行解冻，离心分取血清20 μL，后将EGFP-AQP-4 200 μL加入离心血清中，将其维持在4 ℃进行轮转并过夜，后在混合液中加上提前经过超低IgG胎牛血清处理的ProteinA-Sepharose 4B 75 μL，之后在室温下轮转2 h，离心分取血清[6]。在分取出的血清液中加入1 mL细胞裂解液进行漂洗沉淀，连续进行3次，后将150 μL漂洗沉淀复合物加入其中，再将其加入96孔酶标板中，通过酶标仪获得FU值，设定激发波长488 nm，发射波长507 nm[7]。标准值为健康人群的平均FU+3s值，高于标准值即为阳性，以上的血清进行3次检测取平均值 ......
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