替莫唑胺联合氟桂利嗪对胶质瘤细胞体外作用机制(2)
1.2 细胞培养 胶质瘤U87、U251、CHG-5、SHG-44细胞株购自中科院上海细胞库,于含10%胎牛血清、1%青链霉素的DMEM的高糖培养基,在室温下5%CO2的孵育箱培养。取对数生长期细胞且活性>95%用于实验。1.3 方法
1.3.1 细胞抗增殖试验 取对数生长期的U87、U251、CHG-5、SHG-44细胞悬液接种于96孔板,每孔3 000个,预先置于37 ℃,5%CO2饱和湿度的培养箱内培养,使细胞贴壁生长并长满孔底。24 h后将各浓度药物10 μL加入培养孔,每浓度药物设4个复孔,空白组(无细胞、试剂)4个复孔,对照组(只有等量溶剂)4个复孔。各药液细胞培养孔的FZ、TMZ、FZ+TMZ浓度分别为FZ(5、10、20、40、80 μg/mL),TMZ(50、100、200、400、800 μg/mL),继续培养24 h后每孔加10 μL的CCK-8溶液,孵育2 h在酶联免疫检测仪450 nm处检测光吸收值(optical density,OD值),然后计算不同浓度的增殖抑制率 ......
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