1.2 方法

    1.2.1 标本的采集 采集过程及具体要求如下：(1)分别取两组外周血2 mL，放入加有EDTA的抗凝试剂管里，如果不立即进行DNA提取，则必须于30 min内置入-80 ℃的低温冰箱里冻存以便备用，采用上海生工生物公司生产的UNIQ-10柱式基因组DNA抽提试剂盒提取[5]。冷冻标本必须先解冻，新鲜标本则可以直接进行基因提取，对其实施电泳检测，并应用核酸蛋白分析仪测量其OD值，提取完成后放入-20 ℃中保存。

    1.2.2 PCR扩增 根据480BP片段是否存在判断GSTT1基因是否缺失，GSTT1基因PCR反应体系含100～500 ng模板DNA、0.5 pmol/L引物、200 pmol/L dNTP、2.0 mmol/L MgCl2、0.5 U TaqDNA聚合酶和相应的缓冲液[6]。总反应体积为30 μL。反应条件为94 ℃ 5 min;94 ℃ 1 min、59 ℃ 1 min、72 ℃ 1 min，35个循环;72 ℃ 10 min。反应产物在1.7%琼脂糖凝胶(含0.5 pg/mL溴化乙啶)中電泳约40 min(120 V)后 ......