如下。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 回顾性分析2017年6月-2018年6月在本院接受治疗的60例晚期结直肠癌患者的临床资料，经手术获取癌灶组织与癌旁健康组织。60例患者中，男38例，女22例，年龄46～78岁，平均(61.3±6.9)岁，直肠癌24例、结肠癌36例。纳入标准：符合《中国结直肠癌诊疗规范》中相关诊断标准，国际抗癌联盟(TNM)分期Ⅲb期或Ⅳ期，临床资料完整、病理诊断明确，均经放化疗或免疫治疗[8]。排除标准：合并其他恶性肿瘤者，生命体征控制不稳定者，主要器官严重功能异常者，合并基因遗传性疾病者，存在其他可能影响研究结果的因素者。本研究经医院伦理委员会批准。

    1.2 方法 免疫组化，试剂：兔抗人FoxM1单克隆抗体，TNF-α兔抗人单克隆抗体，超敏试剂盒，DAB显色试剂盒，Envision广谱二抗，均购自上海麦仓生物科技有限公司。使用10%中性福尔马林固定全部组织标本，在常规方式下脱水，石蜡包埋，在4 μm厚度下连续切片，65 ℃下烘烤，二甲苯与乙醇脱蜡，3%过氧化氢孵育10 min，高压锅煮沸2 min抗原修复，滴加一抗37 ℃、2 h，滴加二抗37 ℃、30 min。每个步骤后均用PBS缓冲液充分洗涤。滴加DAB显色剂 ......