王文康 许立新 阮祥才 郑彬 林涛 应彦璐 李恒昌

    双孔钾离子通道TRESK 在脊髓背根神经节广泛表达，除了维持神经元静息膜电位及神经递质的释放，还介导了脊髓水平神经病理性疼痛的发生，但具体机制不明确，TRESK 可被谷氨酸激活，但对脊髓神经元的作用不详[1-2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是长度大于200 个核苷酸的非编码RNA，在表观遗传、细胞周期和细胞分化等调控中发挥重要作用[3-4]。本研究观察谷氨酸对大鼠脊髓神经元TRESK 的效应，通过基因芯片技术，检测脊髓神经元TRESK 变化对lncRNA 表达谱的影响，探讨TRESK 是否通过lncRNA 作用于下游信号通道发挥生物功能，为阐明脊髓神经元TRESK 在神经病理性疼痛中的作用机制奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 动物和材料 动物为原代SD 大鼠，体质量180～250 g。主要材料：大鼠脊髓背角神经元(ScienCell，M1580-57)、神经元培养基(ScienCell，1521)、倒置光学显微镜(奥林巴斯，CKX41)、细胞恒温培养箱(赛默飞，HERAcell150i)、lncRNA定量试剂盒(日本Takara 公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 大鼠脊髓神经元培养 在无菌解剖液的平皿内分离脊髓，0.25%胰蛋白酶经37 ℃消化并吹打，吸取细胞悬浮液移置培养皿中。过滤及沉淀后加入3 mL 的培养基，稀释计数后以5×105个/mL将细胞接种于经多聚赖氨酸处理的1×106个/孔，500 μL/ 孔，置于37 ℃、5%CO2培养箱中，1 d后更换饲养培养液。4 d 后于培养液内加入阿糖胞苷4 μg/mL，用于抑制非神经细胞增殖，培养7 d后进行实验。

    1.2.2 实验分组和处理 培养原代大鼠脊髓神经元细胞 ......