冯召岚 盛健健 董爱武 李江雄 曹玲玲

    糖尿病足是糖尿病的严重并发症之一，患者足部溃烂，创伤难愈，严重时甚至导致截肢及死亡[1]。相关调查显示，约15%的糖尿病患者遭受足部溃烂的折磨，全球范围内每20 秒就有1 例因糖尿病而截肢的患者，而70%的截肢患者往往在5 年内死亡[2]。糖尿病足的高截肢率及高死亡率严重威胁患者生命安全，因此积极探究糖尿病感染性慢性创面的治疗，刻不容缓。富血小板(platelet-rich plasma，PRP)凝胶是静脉血梯度离心分离后，以氯化钙及牛凝血酶激活的产物，含有多种生长因子，有利于细胞增殖[3]。Elsaid 等[4]分别给予糖尿病足患者PRP 凝胶外敷及生理盐水处理，发现PRP 凝胶具有明显缩小患者足部溃疡面积的作用。秦新愿等[5]研究指出，PRP 局部注射在促进糖尿病足溃疡创面修复方面效果良好。脂肪干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)具有分化为表皮细胞、血管内皮细胞的多向分化潜能，可有效促进创面愈合。此前，国内外多项研究证明，PRP 凝胶联合ADSCs 治疗皮肤创伤，效果明显[6-7]。但关于其治疗机制，研究甚少。本研究分析了磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide-3-kinase，PI3K)/ 蛋白激酶B(protein kinase B，Akt)信号通路在PRP 凝胶联合ADSCs 治疗糖尿病足中的作用，现汇报如下。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 78 只8 周龄清洁级雄性大鼠，体重200～240 g，购自上海美轩生物科技有限公司，合格证号：11400700197085。所有动物适应性饲养6 周，室温控制在20 ℃左右，湿度控制在60%～70%。本实验方案经医院伦理委员会审核批准，实验操作符合相关动物伦理学要求。

    1.2 主要实验试剂及仪器 链脲佐菌素(streptozotocin，STZ，美国Sigmag)，磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution，PBS，美国Hyclone)，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(上海如吉生物科技发展有限公司)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，阿根廷Natocor)，苏木精-伊红染色剂(hematoxylin-eosin staining，HE，中国上海索莱宝)，CD31 抗体(美国Abcam)、PI3K/Akt 抗体(美国Abcam)，TRETrizol(美国Thermofisher)，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH，中国上海生工) ......