吴启润 周东明 吕晓峰 段文禹 王孟辉 高岩

    四肢长骨节段性骨缺损的修复一直是临床治疗的难题[1]。临床上，传统治疗方法具有一定的缺点如自体骨移植易造成二次损伤、感染；异体骨移植存在疾病传播风险、骨愈合缓慢及免疫排斥等[2-3]。而通过膜引导下骨再生技术是治疗节段性骨缺损的一种新思路和新方法[4-5]。但目前制备的膜管生物力学强度不高，不足以保持相应的膜管下容积，活动后导致膜管移位、变形，影响膜下新骨形成、重塑，从而限制了其临床应用[6-7]。Ilizarov 技术通过牵张作用治疗骨缺损，但该方法产生钉道感染、过程痛苦，且对患者心理健康产生不利影响[8]，临床上尚无有效方法治疗长段骨缺损。

    近年，探索引导性骨再生材料修复骨缺损已经成为骨科领域的一个研究热点。将纳米羟基磷灰石(nanometer hydroxyapatite，Nano-HA)与胶原蛋白以一定的方式复合以后得到类似自然骨骼的结构，可作为骨修复材料。纳米羟基磷灰石强度高，钙磷结构接近于自然骨骼，生物相容性好；Ⅰ型胶原蛋白具有免疫原性低，易降解等特点，同时它影响细胞的分化增殖，参与细胞代谢的多个过程，是保持细胞正常功能不可缺少的物质。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)能够多向诱导分化潜能，扩增能力强。本实验采用BMSCs 联合纳米羟基磷灰石胶原蛋白(Nano-HA/COL)复合支架，植入兔骨缺损处，观察其修复效果。

    1 材料与方法

    1.1 主要仪器和试剂 LIVE/DEAD 染色试剂盒(美国Life Technologies 公司)；注射用青霉素钠(生产厂家：山东圣旺药业股份有限公司，批准文号：兽药字150061248，规格：160 万单位/支)；超低温冰箱(Hermo Fisher Scientific 公司)；戊二醛消毒熏箱(江苏泰州宏泰实验设备厂)；流式细胞仪(美国Beckman Coulter 公司)；胎牛血清(FBS)(美国Gibico 公司)；PBS 缓冲液(美国 Hyclone 公司)；1 mL 一次性注射器(山东威高股份有限公司)；Ⅰ型胶原蛋白(苏州天可贸易有限公司)；二氧化碳孵育箱(美国Thermo Fisher 公司)。

    1.2 实验动物 国产家兔30 只[2 月龄，体重2～2.5 kg，不限雌雄，由包头医学院动物实验中心提供动物许可证：SCXK(蒙)2014-0003]。实验操作在包头医学院动物实验中心进行 ......