雷公藤甲素对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞线粒体自噬、NLRP3 炎症小体活化和细胞焦亡的影响
货号,1材料与方法,1细胞,2主要试剂与仪器,3细胞培养,4蛋白质印迹法(Westernblotting)检测细胞线粒体自噬,NLRP3炎症小体激活和细胞焦亡相关蛋白
康艳慧,穆萍萍,张海雷1.北京大学第一医院太原医院 太原市中心医院 风湿免疫科,山西 太原 030001
2.北京大学第一医院太原医院 太原市中心医院 病理科,山西 太原 030001
3.太原市第四人民医院 内科,山西 太原 030053
类风湿关节炎是一种慢性进行性的自身免疫性关节疾病,具有高发病率和高致残率的特征。类风湿关节炎患者主要病因是成纤维样滑膜(FLSs)细胞异常增殖和炎症因子大量释放,进而破坏患者关节局部结构,最终导致关节畸形和功能障碍[1]。雷公藤是一种临床上用于治疗风湿性关节炎的传统中草药,而雷公藤甲素是从雷公藤中分离鉴定出的一种主要活性成分,目前已有的研究表明,雷公藤具抗类风湿、抗炎症等作用,降低炎症因子白细胞介素(IL)-18 和IL-1β 水平[2-3]。因此,雷公藤甲素治疗类风湿关节炎具有一定疗效,但其具体的作用机制尚不明确。近期,有研究表明雷公藤能够通过抑制LC3B 蛋白表达,增强p62 表达抑制线粒体自噬,同时还减少NLRP3 表达进而缓解结肠炎引发的炎症损伤[4]。NLRP3 的表达和细胞焦亡息息相关,并且在类风湿关节炎滑膜组织中检测到细胞焦亡相关蛋白GSDMD-N 表达显著上调[5]。基于此,本研究通过比较不同质量浓度的雷公藤甲素对类风湿关节炎FLSs 细胞线粒体自噬、NLRP3 炎症小体的活化和细胞焦亡的影响,探讨雷公藤甲素治疗类风湿性关节炎的作用机制。
1 材料与方法
1.1 细胞
FLSs 细胞(货号ZY-R025)和类风湿关节炎FLSs 细胞(货号HZ-H197)购自上海沪震生物科技有限公司。
1.2 主要试剂与仪器
雷公藤甲素(质量分数≥98%,货号38748-32-2)购自上海源叶生物科技有限公司;二甲基亚砜(DMSO,货号01934-1L)购自Sigma-Aldrich 公司;青霉素–链霉素溶液(货号SV30010)、DMEM(货号SH30022.01B)培养基购自Hyclone;细胞焦亡检测试剂盒(货号为ab39412)购自Abcam 公司;IL-1β、IL-18 ELISA 检测试剂盒(货号JC-E1109、JCA04206)购自上海机纯实业有限公司。本研究所用抗体微管相关蛋白 1 轻链 3B(LC3B,货号ab192890)、聚集素-1(p62,货号ab109012)、抑制素2(PHB2 ......
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