宋莎莎，王永芳，陈毅，李新宇

    中国医学科学院 北京协和医学院 皮肤病研究所，江苏 南京 210042

    痤疮是皮肤科常见的一种慢性炎症性疾病，主要发生于颜面和胸背多脂区，临床主要表现为粉刺、丘疹、脓疱和结节等多形性皮损，好发于青春期，对青少年的心理和社交影响很大[1]。痤疮的发病机制主要包括皮脂腺大量分泌，毛囊皮脂腺导管上皮过度角化，微生物尤其是痤疮丙酸杆菌Propionibacterium acnes的定殖及炎症和免疫反应。机体免疫细胞如角质形成细胞、单核细胞等在抵抗P.acnes等入侵过程中释放白细胞介素(IL)-1、IL-8 和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子，这些炎症因子将炎症细胞趋化至毛囊周围，引起炎性损伤[2]。

    壬二酸又名杜鹃花酸，是一种来自杜鹃花的天然含有9 个碳原子的饱和直链二羧酸。壬二酸的抗炎和抗氧化特性已被证实，其外用可以治疗酒糟鼻、寻常痤疮、黄褐斑和炎症后色素沉着等疾病[3]。《中国痤疮治疗指南(2019 修订版)》推荐壬二酸是轻中度痤疮的二线外用药[4]。水杨酸最早是从柳树皮中提取出的天然活性成分，属于β-羟基酸，因其具有较好的脂溶性，更易深入毛囊皮脂腺深部而溶解粉刺，被广泛用于治疗痤疮和脂溢性皮炎等疾病[5]。本研究体外观察壬二酸和水杨酸对P.acnes的胞壁成分肽聚糖(PGN)和脂磷壁酸(LTA)、热灭活P.acnes以及佛波醇酯(PMA)和细菌脂多糖(LPS)分别诱导的人角质形成细胞HaCaT 和人单核细胞THP-1 产生炎症因子的影响，通过分子对接技术分析2 种药与Toll样受体4(TLR4)蛋白间的相互作用模式以及实验验证对HaCaT 细胞表面TLR4 蛋白表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    壬二酸(质量分数99.15%，上海易恩化学技术有限公司，批号RH244687)；水杨酸(质量分数99.7%，山东新华制药股份有限公司提供，批号21036)；人角质形成细胞永生化细胞株HaCaT、人单核细胞株THP-1(本室维持保存)；P.acnes(ATCC6919，本室维持保存)；PGN、LTA、PMA、LPS(美国Sigma 公司，货号分别是69554、L3265、P1585、L4130)；DMEM、RPMI 1640 培养基、胎牛血清、2-巯基乙醇(美国Gibco 公司)；脑心浸出液肉汤(BHI，青岛高科园海博生物技术有限公司)；人IL-8、IL-1β 和TNF-α ELISA 试剂盒(北京四正柏生物科技有限公司)；4%多聚甲醛(南京森贝伽生物科技有限公司)；TLR4 抗体(美国Santa cruz 公司)；Cell Counting Kit-8、Triton X-100、山羊血清、Alexa Fluor 488 标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)、DAPI 染色液、BCA 蛋白定量试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；ECL 显色液(美国Thermo Fisher Scientific公司)；厌氧产气袋和密封培养罐(日本三菱MGC) ......