陈 楠， 郝乐乐， 严 姣， 李亚妮， 刘贺荣

    (宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004)

    甲醇(CH3OH)可经呼吸道、消化道、皮肤接触进入机体，甲醇主要在肝中代谢，在体内醇脱氢酶催化作用下代谢成甲醛，然后通过醛脱氢酶被迅速氧化代谢为甲酸[1]。其中甲酸被认为是甲醇毒性作用中的关键成分[2]。甲醇中毒后主要表现为中枢神经系统损伤、眼部损伤和代谢性酸中毒。有研究表明[3]，甲醇中毒大鼠脑中可检测到甲酸，说明其可通过血脑屏障进入大脑发挥毒作用。因此推测代谢产物甲酸可能在甲醇神经毒性中发挥着重要的作用。细胞凋亡(apoptosis)又被称为Ⅰ型细胞程序性死亡，是一种基于遗传机制的细胞死亡模式，其诱导了一系列细胞形态学改变，如细胞皱缩、染色质凝聚、分裂凋亡小体等[4]，有报道表明[5]，各种有害因素引起的中枢神经系统的损伤都与细胞的线粒体凋亡密切相关。自噬是Ⅱ型细胞程序性死亡方式，自噬在维持神经元和胶质细胞正常功能中起到重要作用，维持神经元和神经胶质活动需要大量的能量，而这些能量的需求在很大程度上是通过自噬来解决的[6-7]。越来越多的研究表明[8-9]，细胞的最终命运是由自噬和凋亡的交叉作用决定的。可能是自噬损伤可促进细胞凋亡，继而破坏自噬过程，最终导致细胞死亡[10]。因此，本文通过不同浓度甲醇代谢物——甲酸处理PC12 细胞，探讨甲酸对PC12 细胞凋亡及自噬的影响，为进一步阐明甲醇神经毒性奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器

    甲酸(天津大茂生物公司/中国)；胎牛血清(Biological Industries/以色列)；MEM 培养基(上海中桥新舟/中国)；CCK-8 细胞增殖与毒性检测试剂盒(贝博公司/中国)；凋亡试剂盒(贝博公司/中国)；AO/EB(贝博公司/中国)；荧光显微镜(Olympus/日本)；流式细胞仪(Sysmex/日本)，电泳仪(Tanon/中国)。

    1.2 细胞培养与染毒

    肾上腺嗜铬细胞瘤高分化细胞株(PC12 细胞，购自中国上海科学院细胞库)用1640 完全培养液轻柔吹匀制备为细胞悬液，加入适量的细胞悬液于细胞培养瓶中，置于细胞培养箱培养。取对数生长期且细胞状态良好的PC12 细胞，弃旧培养液，经过洗涤、消化后制备成细胞悬液，计数并用1640 完全培养液稀释细胞密度最终为6×103个/mL。分别接种于0、8.32、10.40、12.48、14.56、16.64、18.72 mmol·L-1甲酸的96 孔板中 ......