翁晓梦，李 玲，德小明，李丽萍，宋贝贝，黄金瑞，郭晓英，马慧颖

    (宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系，宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，生育力保持教育部重点实验室，银川 750004)

    邻苯二甲酸酯类物质(phthalic acid esters，PAEs)是一种环境内分泌干扰物，其中邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)作为广泛使用的增塑剂，常用做聚氯乙烯(PVC)制品、塑料袋、工业涂料、化妆品、食品包装、输血袋等的原料，是迄今为止我国产耗量最大、应用最为广泛的增塑剂类型[1]，被列为人类可能致癌物(IARC分类为Group2B[2]。DEHP进入体内后通过哺乳动物肠道水解酶的作用代谢为邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)，研究表明MEHP毒性高于DEHP，在PAEs致生殖发育毒性中发挥主要作用[3]。体内外研究结果证实[4]，在胚胎期暴露环境内分泌干扰物引起的表观遗传修饰，可以诱导基因表达的改变，并且这种改变可能在整个生命周期中持续存在，表观遗传学最主要的表达方式之一是DNA甲基化，在MEHP致睾丸间质细胞(TM-3)雄性生殖毒性的研究中，对DNA甲基化水平的研究尚不够深入，因此本研究拟从表观遗传学的角度来深入探讨MEHP的雄性生殖毒性机制，进而为后续的靶向研究提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株来源、主要仪器和试剂

    睾丸间质细胞株(TM-3细胞，美国ATCC细胞研究中心)。HF90 CO2培养箱(中国上海力申科学仪器有限公司)，SW-CJ-1CU超净工作台(中国苏州安泰空气技术有限公司)，CKX41倒置相差显微镜(日本Olympus公司)，Neofuge15R高速冷冻离心机(中国上海力申科学仪器有限公司)，I510全波长酶标仪(芬兰赛默飞世尔公司)，LDZM-40KCS-II立式压力蒸汽灭菌器(中国上海申安医疗器械厂)，BioRad荧光实时定量PCR仪(上海伯乐生命医学产品有限公司)。

    MEHP标准品(纯度为97%，美国Sigma公司)，DMEM培养基、青链霉素混合液、胰酶、胎牛血清、DMSO等(美国Gibco公司)，CCK-8细胞增殖检测试剂盒，Hoechst荧光染色试剂盒(中国江苏凯基生物有限公司)，5-甲基胞嘧啶(5-mc)免疫荧光抗体(美国CST公司)，荧光二抗(中国北京中杉金桥)，柱形核酸纯化产品、Prime-ScriptTMRT Master Mix反转录试剂盒、TB Green Premix Ex TaqTMⅡ实时荧光定量试剂盒(大连宝生物工程有限公司)、目的基因及内参基因引物(中国上海生工生物公司) ......