李艳宁，李光琪，屈昱良，潘俊斐，楚元奎，张晓春，徐广贤，3

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院儿科，银川 750004；3.广东医科大学医学技术学院医学检验系，东莞 523000)

    纳米抗体是存在于骆驼科体内的一种天然缺失轻链的重链抗体(heavy chain variable area，VHH)，具有分子量小、特异性高、易通过血脑屏障等众多优势，有广阔的应用前景[1]。目前，纳米抗体制备所采用的关键技术是噬菌体表面展示技术，其原理是通过对目标抗原反复的“吸附—洗脱—扩增”后，使得噬菌体抗体库中能与靶分子特异结合的抗体得到高度富集[2]，一个库容量大及多样性好的噬菌体纳米抗体库是获得特异性抗体的关键所在，特别是针对天然抗体库而言至关重要。而影响抗体库质量的主要因素除了需要特异性好的PCR引物外，高转化效率也是实现构建有效噬菌体抗体库的关键[3]。

    目前，电转化法是构建抗体库的最佳途径，也是分子生物学中的常用技术，广泛应用于外源基因的表达、基因克隆及定位等研究[4]。该技术的主要原理是在瞬间强大电压的作用下，溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性，从而使带电的外源物质以类似电泳的方式进入细胞膜[5]。在不同实验室环境的影响下，感受态细胞的制备以及转化条件都有所不同，故转化效率也存在差异，

    因此，应该根据实际情况，对电转化条件进行优化进而探索最佳转化条件，提高转化效率。影响电转化效率的因素颇多，除了细菌的生长状态及外源物质的质量外[6]，电压影响细胞膜的穿透性或外源分子与细胞膜的融合[7]，T4 DNA连接酶也会降低转化效率[8]。此外，电转化结果受到众多因素的综合影响，实际上各个因素不是孤立存在的，而是相互联系、相互作用的。为此，本研究旨在利用Bio-Rad公司的电转化仪，对DNA电转化条件进行优化，得到最大转化效率。据此，建立高质量的天然噬菌体抗体基因库，便于下一步的筛选。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要仪器、试剂与培养基0.2 cm电转化杯、基因电穿孔仪及MyCycler PCR仪(Bio-Rad公司)；Nanodrop 2000、双光束紫外可见分光光度计TU-1901(Thermo公司)；恒温培养箱、台式高速低温离心机(力康公司)。限制性内切酶Not I、Sif I及T4 DNA连接酶(NEB公司)；DNA回收试剂盒(TIANGEN公司)；2×YT培养基、SOC培养基 ......