周云花 ， 赵志军， 杨 红 ， 康 佳 ， 苏雅静 ， 乔 霞 ， 于 欣

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学总医院 宁夏病原微生物重点实验室，银川 750004；3.宁夏医科大学总医院医学实验中心，银川 750004； 4.宁夏医科大学临床医学院医学检验系，银川 750004)

    金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌是医院感染最常见的病原体，与人类多种疾病相关，且对大多数抗生素表现出极高的耐药性，由此引发感染者病死率大幅上升，给临床抗感染治疗带来诸多问题[1-5]。抗生素敏感性实验是目前公认的针对细菌耐药性和敏感性的检测方法，其通过测定抗菌药物在体外抑制病原微生物生长的效力，以确定细菌对抗生素的敏感性[6]。临床现有较多抗生素敏感性实验可用于细菌药敏检测，如纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、VITEK2 全自动细菌鉴定仪等，以上方法均可为临床检测细菌耐药性提供有效依据，但仍存在操作烦琐、成本高、仪器依赖性强等问题，且培养过程需要耗费大量时间实现细菌富集[7-9]，从而增加临床耐药菌株感染者的病死率，影响感染者的预后。

    本研究设计了一种改良微量肉汤药敏实验(荧光法)，利用荧光二抗分别捕获与金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌特异性结合的一抗，通过检测细菌是否产生荧光来判定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)。本文通过比较改良微量肉汤药敏实验(荧光法)、VITEK2 全自动细菌鉴定仪和微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌耐药性的实验结果，验证三种方法的有效性和统一性，为临床提供一种快速药敏实验备选方法。

    1 资料与方法

    1.1 菌株与主要试剂

    金黄色葡萄球菌ATCC29213、大肠埃希菌ATCC25922 购自上海汉尼生物技术有限公司；临床分离金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌来自宁夏医科大学医学实验中心微生物组；LB 肉汤培养基购自中国北京索莱宝科技有限公司(货号：L1010)；MH 肉汤培养基购自中国北京索莱宝科技有限公司(货号：M8556)；苯唑西林、利奈唑胺、环丙沙星、青霉素、红霉素、亚胺培南、头孢曲松、哌拉西林和妥布霉素均购自中国大连美仑生物技术有限公司；山羊抗小鼠IgGH&L(FITC)购自英国 Abcam 公司(批号：6785)；Lipid ALPS Poly-clonal Antibody(货号：PA1-73178)、Alexa Fluor 488 Protein Labeling Ki(t货号：A10235)、96 孔酶标板均购自美国Thermo Fisher Scientific 公司 ......