黄金瑞，李 玲，德小明，李丽萍，宋贝贝，郭晓英，马慧颖

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系，宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室，生育力保持教育部重点实验室，银川 750004；2.陕西省富平县疾病预防控制中心，富平 711700)

    邻苯二甲酸酯(phthalates，PAEs)是一类环境内分泌干扰物，常作为增塑剂被广泛用于食品包装、玩具、化妆品、医疗器械、装修材料等。邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[(Di(2-ethyl)hexyl phthalate，DEHP]是应用最为广泛的增塑剂之一，占国产PAEs的80%[1]。调查发现，DEHP是宁夏地区环境中主要的PAEs[2]。DEHP主要经呼吸道、消化道和皮肤接触途径进入机体，在体内进一步转化为邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-(2-ethylhexyl)phthalate，MEHP)对机体产生各种毒性作用[3]，其对生殖能力的毒性引起了人们广泛关注[4]。已有实验证实[5]，活性氧(ROS)水平升高可以上调p-p38 MAPK、p-JNK及Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达，诱导细胞凋亡。本实验通过观察p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125对MEHP染毒致小鼠睾丸间质(TM-3)细胞凋亡情况，探讨p38/JNK MAPK信号通路对MEHP致TM-3细胞凋亡的影响及其作用机制，为研究MEHP产生雄性生殖毒性机制提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要仪器与试剂

    主要仪器：HF90 CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司，中国)，高压蒸汽灭菌器(TOMY公司，日本)，SW-CJ-1CU超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司，中国)，正倒置一体显微镜(ECHO公司，美国)，Neofuge15R高速冷冻离心机(上海力申科学仪器有限公司，中国)，全波长酶标仪(PerkinElmer公司，美国)，流式细胞仪(BD公司，美国)，凝胶成像仪(Thermo Fisher Scientific公司，新加坡)。

    主要试剂：TM-3细胞株(ATCC细胞研究中心，美国)，MEHP标准品(纯度为97%，Sigma公司，美国)，SP600125、SB203580(Med Chem Express公司，美国)，DMEM培养基、胰酶、青链霉素混合液、胎牛血清(Gibco公司，美国)，CCK-8法细胞增殖检测试剂盒、Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒(上海贝博生物科技有限公司 ......