王 菲， 田 媛， 郝 耀， 刘心蕊， 张淑雅， 杨延周， 裴承斌， 王燕蓉， 裴秀英

    (宁夏医科大学基础医学院，生育力保持教育部重点实验室，宁夏生殖与遗传重点实验室，银川 750004)

    目前癌症诊疗手段已进入逐步稳定的状态，但由于放化疗导致的卵巢早衰、卵泡激活障碍等卵巢不可逆损伤问题仍然存在[1]。近年来，卵巢冻存及移植作为保存癌症患者生育力的一种方法，被广泛应用于肿瘤生殖领域[2]。而冻存卵巢无血管吻合移植术后的缺血缺氧，是移植失败的主要原因。移植后缺血再灌注将导致卵泡丢失[3]、卵巢颗粒细胞凋亡[4-5]、卵巢血管严重受损[6-7]；且移植早期的缺氧及随后的复氧[8]，使得细胞内活性氧(ROS)增加，过量的ROS 产生可诱导蛋白质、脂质和DNA 修饰，从而导致细胞损伤[9]。促卵泡刺激素(FSH)在卵泡发育和颗粒细胞增殖中发挥重要作用[10]。研究[11]发现，在卵巢冻存过程中添加FSH 能够提高移植卵巢存活率，抑制缺血缺氧导致的细胞凋亡，增强移植物血流重建。而在缺氧诱导的卵巢颗粒细胞中，FSH 干预可通过上调缺氧诱导因子(HIF-1α)的表达，进而诱导颗粒细胞自噬，这对颗粒细胞的增殖和卵泡发育具有保护作用[12]。本研究以小鼠卵巢颗粒细胞为研究对象，在细胞层面模拟卵巢移植早期缺血缺氧状态，探讨FSH 对缺血缺氧诱导的卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 实验动物 选取70 只21 日龄清洁级雌性ICR 小鼠为研究对象，小鼠购自宁夏医科大学实验动物中心[许可证号：SCXK(宁)2020-0001]，光照时间周期为12 h 照明/12 h 黑暗，动物室温度保持在(24±2)℃，湿度保持在40%～50%，定期更换鼠笼、水粮、垫料并消毒。

    1.1.2 主要试剂 注射用重组人促卵泡刺激素(BA060658，德国Merck 公司)，注射孕马血清(PMSG，B210125，宁波三生生物科技有限公司)，Annexin V-FITC/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒(BB-4101-100T，上海贝博生物科技有限公司)，TUNEL 检测试剂盒(A113-02，南京诺唯赞生物科技有限公司)，HE 染色试剂盒(G1121，北京索莱宝科技有限公司)，FSHR 兔多克隆抗体(bs-0895R，北京博奥森生物技术有限公司)，β-actin兔多克隆抗体(bs-0061R，北京博奥森生物技术有限公司)，Bcl-2兔多克隆抗体(Ab-AF6139，江苏亲科生物研究中心有限公司) ......