蒯文和，马江涛，刘 翔，马学平，曹 慜，张银豪，赵建华

    (宁夏疾病预防控制中心，银川 750004)

    新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019，COVID-19)是由新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)SARS-CoV-2引起的急性传染病[1]，已形成全球大流行，每日都有新增和死亡病例的报道[2]，严重危害人类健康。随着国内新冠肺炎疫情的有效控制和境外输入病例的不断发现，加强输入病例防控成为我国现阶段防控的主要任务。本文通过对2020年2月25日宁夏发现的中国首例境外输入病例开展回顾性全基因组分析，旨在从分子水平解释该病例标本的病毒基因特点和变异情况，为后续国内输入性病例研究提供资料。

    1 资料与方法

    1.1 病历资料

    丁某某，男性，23岁，未婚，户籍地为中卫市中宁县大战场乡清河村，入境前在伊朗从事翻译工作。2020年2月19日乘坐飞机从伊朗出发，2月20日中转莫斯科后抵达上海浦东机场，2月22日乘火车次日到达兰州，2月24日乘火车到达中卫后，医学隔离观察期间，咽拭子检测为新冠病毒核酸阳性。

    1.2 SARS-CoV-2核酸检测

    病例鼻咽拭子标本使用Qiagen公司病毒核酸RNA提取试剂盒(滤柱法)，按照试剂盒说明书提取病毒RNA，提取物使用上海伯杰公司新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)进行检测。

    1.3 文库制备及高通量测序

    利用Invitrogen公司的Invitrogen SuperScriptTMⅢFirst-Strand Synthesis SuperMix试剂盒使用随机引物(Random Hexamers，试剂盒自带)进行反转录，合成第一链，使用PCR仪和冰浴进行逆转录。反应体系为：RNA 6 μL，Random hexamers primer 1 μL，Annealing Buffer 1 μL；65℃5min ......