王业丰，姚 遥，杨欣河，邹 彬，李 佳，李 娟，4

    (1.宁夏医科大学公共卫生与管理学院，银川 750004；2.宁夏医科大学基础医学院，银川 750004；3.宁夏医科大学药学院，银川 750004；4.宁夏少数民族医药现代化教育部重点实验室，银川 750004)

    阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是由老化、遗传和环境多因素共同导致的一种神经退行性疾病，是痴呆最常见的病因[1]，其核心病理特征是脑内β 淀粉样蛋白(amyloid-β protein，Aβ)沉积、神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)以及大脑中持续的神经炎性反应[2]。小胶质细胞是驻留在中枢神经系统(CNS)中的一种天然免疫细胞[3]。全基因组关联研究发现，与AD 中的炎症过程相关的基因(TREM2、CD33、CR1、PLCG2和INPP5D)在中枢神经系统中主要由小胶质细胞表达，这表明小胶质细胞是AD 的神经炎症发病机制的关键参与者[4]。动物研究和临床前研究[5]显示，使用抗炎药物可以有效抑制小胶质细胞的活化，降低脑内炎症因子水平，减轻神经元损伤，改善认知功能；苦参碱是中药苦参中的代表性生物碱和主要有效成分，其抗炎作用尤为显著[6]。有研究[7-8]显示，苦参碱可以降低AD 大鼠和小鼠脑内的炎症因子水平，减弱对海马神经元线粒体超微结构的损伤，从而抑制神经炎症，改善AD 大鼠的认知功能，但机制并不明确。CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1)是一种趋化因子受体，可以与多种功能性配体结合，参与调节小胶质细胞的活化和炎症因子的释放[9]。本研究拟通过检测苦参碱对小胶质细胞活化、炎症因子的释放以及CX3CR1 蛋白的表达情况，为苦参碱治疗神经炎症的机制研究提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    小鼠小胶质细胞株(N9)购于通派(上海)生物科技有限公司；苦参碱购于宁夏紫荆花药业股份有限公司盐池药厂(纯度>98%，批号180905)；MTT、米诺环素(minocycline，MINO)、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)及含DAPI 的抗荧光衰减封片剂购于北京索莱宝科技有限公司；高糖DMEM、胎牛血清(FBS)、PBS 缓冲液、胰蛋白酶、青霉素-链霉素混合液(100×)购于美国Gibco 公司；RAPA 裂解液(强)、PMSF、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、TBST 购于武汉塞维尔生物科技有限公司；BCA蛋白含量检测试剂盒购于江苏凯基生物技术股份有限公司；山羊血清购于北京中杉金桥生物技术有限公司；山羊抗兔HRP 偶联二抗、山羊抗兔红色Alexa Fluor 偶联二抗(594)、山羊抗鼠绿色Alexa Fluor 偶联二抗(488)购于亚科因(武汉)生物技术有限公司；CX3CR1、β-actin 抗体购于江苏亲科生物研究中心有限公司；分化抗原簇-32(cluster of differentiation-32 ......