常 越，唐 翠，徐 辉，曹相玫，刘仲涛

    (1.宁夏医科大学基础医学院病理学系，银川 750004；2.宁夏医科大学总医院神经外科，银川 750004)

    CD47蛋白也称为整联素关联蛋白(integrinassociated protein，IAP)，分子质量为50 kDa，属于免疫球蛋白超家族中的一员，是普遍分布于细胞外表面的跨膜蛋白。已知CD47的天然配体有：整合素、血小板凝集素-1和信号调节蛋白α(SIRPα)，CD47可以和SIRPγ有微弱的结合[1-2]。研究[3]表明，CD47经过与其配体联合阻碍巨噬细胞介导的吞噬作用，从而逃脱免疫监督。所以，CD47参与的生物学作用包括细胞的黏附、迁移及抑制巨噬细胞吞噬调节炎性反应[4]。近年来，CD47在免疫治疗方面研究较多，抗肿瘤T细胞免疫作用可通过抗CD47抗体的介导促进巨噬细胞吞噬功能的启动[5-7]。相较于CD47低表达的肿瘤细胞，高表达CD47的肿瘤细胞有更强的存活能力，因而CD47高表达的肿瘤细胞可以避免被先天免疫系统攻击[8-9]。CD47作为一种避免巨噬细胞吞噬的信号分子，将有可能成为某些癌症的治疗靶点。因此，本研究构建了hCD47基因重组慢病毒并检测了其在人胶质瘤U87细胞中的表达，为进一步研究CD47基因在恶性肿瘤中的生物学功能及重要意义奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    慢病毒载体pLVX-mCMV-ZsGreen-IRESPuro、293T、U87细胞、HEK293细胞系(北京西贝宏程生物科技有限公司)；GeneCopoeiaGCI-L3化学感受态细胞、HEK293T慢病毒包装细胞系(北京博迈德基因技术有限公司)；离心管、DMEM培养液、PVDF、胎牛血清、青链霉素双抗、无血清培养液和胰酶(宁夏朗凯生物科技有限公司)；针头滤器(美国Millipore公司)；凝聚胺(polybrene)、质粒抽提试剂盒(上海玉博生物科技有限公司)；NotI、BamHI限制性内切酶(New England Biolabs有限公司)，DNA Ladder Marker(北京诺尔塞克科技有限公司)，琼脂糖凝胶回收试剂盒(美国Omega公司)，In-Fusion PCR Cloning Kit(美国Clontech公司) ......