赵宝山，孙光蕊，邢志君，张志民，张 旭，梁宗英

    (承德医学院附属医院胸外科，承德 067000)

    肺腺癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤，且发病年龄的年轻化趋势愈加明显[1]。肺腺癌具有放化疗不敏感、血行转移早的特点，致使患者的总体预后不佳[2-3]。因此，提高肺腺癌的早期诊断率、发现评估预后的新指标和新靶点是肺腺癌治疗的重中之重[4-5]。痉挛性截瘫20(SPG20)是发现于肌肉截瘫中的基因，其编码的蛋白在细胞分裂周期的异常作用与肿瘤的发生具有相关性[6]；研究[7-9]表明，SPG20甲基化与结直肠癌、肝癌和胃癌之间存在密切关系，并作为早期事件。目前对于SPG20基因在肺腺癌组织内甲基化修饰的研究未见报道。本研究通过检测肺腺癌组织内SPG20甲基化水平，探讨其甲基化与肺腺癌发生和发展的相关性。

    1 资料与方法

    1.1 标本来源

    选取2018年2月至2019年8月承德医学院附属医院胸外科进行手术治疗的70例原发肺腺癌患者。其中男性27例，女性43例；≥60岁者38例，<60岁者32例；吸烟患者22例，不吸烟患者48例；按照IASLC第八版制定的标准进行TNM分期[3]：Ⅰ期23例，Ⅱ期32例，Ⅲ期15例；组织学分级：高分化4例，中分化58例，低分化8例；有淋巴结转移11例，无淋巴结转移59例。实验组：70例肺腺癌组织；对照组：70例正常肺组织(距癌组织>6 cm，经术后病理鉴定)。

    1.2 主要试剂和仪器

    甲基化修饰试剂盒(德国QIAGEN公司)；焦磷酸测序试剂(CST公司)；DNA提取试剂盒(北京全式金生物技术股份有限公司)；Wizard Cleanup DNA纯化回收系统(美国Sigma公司)、2×SYBR qPCR Master Mix(美国Promega公司)、PCR扩增仪(美国MJ Research公司)、Real-time PCR仪(MX3000P)(美国Startagene公司)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 DNA提取 取肺腺癌组织及癌旁组织标本100 mg，按照基因组DNA提取试剂盒说明和步骤分别提取DNA，并采用紫外分光光度计检测提取的DNA含量和纯度。提取后-20℃保存DNA。

    1.3.2 亚硫酸氢钠处理 取纯化的DNA样品20μL，以DNA重亚硫酸盐转化试剂盒对组织和血清样本DNA进行亚硫酸盐修饰。将DNA置于95℃水浴中加热20 min，再冰浴20 min，置于42℃、浓度为3 mol·L-1的NaOH溶液中温浴20 min ......