成克伦，高绍莹，陈秀婵，姜 森，马庆庆，周永松，熊云刚，邹阳强

    (贵州航天医院 1.病理科；2.中心实验室，贵州 遵义 563000)

    健康科学基础研究

    实时荧光定量聚合酶联反应在石蜡切片可疑结核病诊断中的应用

    成克伦1，高绍莹2，陈秀婵1，姜 森1，马庆庆2，周永松1，熊云刚1，邹阳强1

    (贵州航天医院 1.病理科；2.中心实验室，贵州 遵义 563000)

    目的探讨实时荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR)法检测结核分枝杆菌DNA在可疑结核病诊断中的应用价值。方法应用FQ-PCR法，对50例可疑结核病的石蜡切片进行结核分枝杆菌DNA检测。结果检出35例结核分枝杆菌DNA阳性，阳性率70.0%；结合临床、影像和检验等资料综合分析后，29例明确诊断为结核病，确诊率为58.0%。结论FQ-PCR能检出石蜡切片部分可疑结核病的结核杆菌DNA，从而确定感染病原体，有助于临床有效诊断。

    实时荧光定量；聚合酶联反应；石蜡切片；结核病

    结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病，可累及人体各个器官，以肺结核病和淋巴结结核病多见，近年来发病率有所上升。典型结核病病理上诊断容易，当出现不典型病理改变呈可疑结核时诊断较困难。本文通过FQ-PCR法，探讨可疑结核病石蜡切片结核分枝杆菌DNA检测的可行性，为确诊结核病提供依据。

    1 资料与方法

    1.1 资料 收集贵州航天医院2015年6月—2016年5月可疑结核病标本50例，其中肺穿刺标本29例，胸膜穿刺标本12例，肠镜活检标本3例，手术切除大标本6例(肺1例、软组织包块1例、关节滑膜2例、淋巴结1例、皮肤1例)。标本来源病例男32例，女18例，年龄25～75岁；临床诊断结核15例。

    1.2 方法

    1.2.1 HE切片 标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋切片，厚4μm，HE染色。

    1.2.2 FQ-PCR检测切片准备 小标本连续切取10片，大标本切取5片，厚5μm，置于1.5mL离心管中。

    1.2.3 切片DNA提取 采用石蜡包埋组织DNA快速提取试剂盒提取DNA，按说明书进行操作，试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司产品。

    1.2.4 FQ-PCR检测 分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)为博奥生物集团有限公司产品 ......