富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞促进兔前交叉韧带重建后腱骨愈合
肌腱,骨密度,凝胶,1材料与方法,2结果,3讨论
张 豪,杨保刚,陈 宇(1.浙江省台州医院 急诊科,浙江 台州 317300;2.浙江省人民医院 骨科,浙江 杭州 310014)
前交叉韧带(anterior cruciate ligament, ACL)重建术是最常见的腱骨愈合手术,腱骨愈合效果不佳的原因是腱骨中的肌腱移植、矿化和成熟并不总是令人满意。富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)是各种生长因子的自体富集来源,已在创伤和骨科手术中广泛使用。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有促进肌腱再生的巨大潜力,含有来自骨髓的BMSCs的宿主细胞有助于腱骨愈合。Wnt/β-catenin途径已被证明在骨骼发育中至关重要,并作为潜在靶点受到了广泛关注。近年来,大量研究报告了Wnt/β-catenin信号通路在成骨分化和骨形成中起着重要作用,但PRP联合BMSCs通过Wnt/β-catenin信号通路对兔ACL重建后腱骨愈合的研究甚少。因此,本实验采用自体PRP联合BMSCs顶端注射的方法将相应的凝胶注入骨道内,观察PRP联合BMSCs是否对腱骨愈合有促进作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物 45只12 周龄新西兰白兔,体质量(2.5±0.2)kg,购自浙江省实验动物中心。
1.2 主要试剂 胎牛血清购自北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司;DMEM/F12培养基购自美国Gibco公司;青霉素、链霉素、油红O和茜红素购自北京索莱宝科技有限公司;CD29、CD90、CD34、CD45、Wnt1、Wnt3a及β-catenin的抗体购自美国Abcam公司;兔VEGF ELISA试剂盒和兔TGF-β1 ELISA试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司;β-actin抗体和IgG-HRP抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。
1.3 BMSCs的提取、分离、培养及体外分化 取5只新西兰兔下肢 ......
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