张 豪，杨保刚，陈 宇

    (1.浙江省台州医院 急诊科，浙江 台州 317300；2.浙江省人民医院 骨科，浙江 杭州 310014)

    前交叉韧带(anterior cruciate ligament, ACL)重建术是最常见的腱骨愈合手术，腱骨愈合效果不佳的原因是腱骨中的肌腱移植、矿化和成熟并不总是令人满意。富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)是各种生长因子的自体富集来源，已在创伤和骨科手术中广泛使用。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有促进肌腱再生的巨大潜力，含有来自骨髓的BMSCs的宿主细胞有助于腱骨愈合。Wnt/β-catenin途径已被证明在骨骼发育中至关重要，并作为潜在靶点受到了广泛关注。近年来，大量研究报告了Wnt/β-catenin信号通路在成骨分化和骨形成中起着重要作用，但PRP联合BMSCs通过Wnt/β-catenin信号通路对兔ACL重建后腱骨愈合的研究甚少。因此，本实验采用自体PRP联合BMSCs顶端注射的方法将相应的凝胶注入骨道内，观察PRP联合BMSCs是否对腱骨愈合有促进作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 45只12 周龄新西兰白兔，体质量(2.5±0.2)kg，购自浙江省实验动物中心。

    1.2 主要试剂 胎牛血清购自北京赛默飞世尔生物化学制品有限公司；DMEM/F12培养基购自美国Gibco公司；青霉素、链霉素、油红O和茜红素购自北京索莱宝科技有限公司；CD29、CD90、CD34、CD45、Wnt1、Wnt3a及β-catenin的抗体购自美国Abcam公司；兔VEGF ELISA试剂盒和兔TGF-β1 ELISA试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司；β-actin抗体和IgG-HRP抗体购自美国Cell Signaling Technology公司。

    1.3 BMSCs的提取、分离、培养及体外分化 取5只新西兰兔下肢 ......