过氧化物酶体增殖物激活受体对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响
罗格列酮,结肠癌细胞系HT-29,流式细胞术,p53基因,Ang-2过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)PP
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【摘要】目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体罗格列酮对结肠癌HT-29细胞抑制增殖的影响，并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度罗格列酮对HT-29细胞增殖抑制率；TUNEL法和流式细胞术,检测细胞凋亡的发生，免疫细胞化学法测定p53基因Ang-2的表达。结果罗格列酮能抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖，并具有时间一剂量依赖性；MTT实验结果表明罗格列酮可抑制HT-29细胞的增殖，TUNEL法和流式细胞术测定结果显示10 μg/ml罗格列酮可明显诱导HT-29细胞凋亡，免疫化学法显示其可上调p53基因的表达，抑制Ang-2的表达。结论罗格列酮对人结肠癌HT-29细胞增殖具有抑制作用，可能与细胞周期阻滞和凋亡相关蛋白表达有关。
【关键词】罗格列酮；结肠癌细胞系HT-29；凋亡；流式细胞术；p53基因；Ang-2过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)PPAR是一类由配体活化的核转录因子，属于核受体超家族成员,参与糖类、脂类代谢以及细胞增殖分化、炎症等多种病理生理过程[1]。近年来其抗肿瘤作用日益受到重视，有研究证明PPARγ在胃癌、肝癌、乳腺癌、大肠癌、胰腺癌、膀胱癌、前列腺癌、甲状腺癌等恶性肿瘤中均有高表达。本研究使用不同浓度的罗格列酮作用于HT-29结肠癌细胞株，检测细胞增殖的各项指标，研究其对p53基因Ang-2表达的作用。1资料与方法
1.1一般资料结肠癌细胞株HT-29购自中南大学湘雅医学院。罗格列酮(Rosiglitazone)四甲基偶氮唑蓝(MTT)和二甲亚砜(DMSO)购自Sigma公司，罗格列酮用DMSO溶解。p53单克隆抗体，兔抗人Ang-2多克隆抗体和免疫组化染色剂试剂盒购自均购自北京中山公司。RPMI1640培养基为Gibco产品。胎牛血清为杭州四季青生物公司产品。
1.2方法
1.2.1细胞培养HT-29细胞在含10%胎牛血清及青霉素、链霉素各1×105 U/L的RPMI1640培养基中贴壁生长，于37 ℃、5% CO2、95% O2培养箱中传代培养，取3～6代细胞用于实验。按照培养基中试剂不同，将培养的HT-29细胞随机分为四组:对照组(培养基)和不同浓度(0、0.1、1.0、10 μmol/L罗格列酮)组。收集对数生长期的细胞，以5×105个细胞/ml接种于培养瓶，24 h换液1次。当细胞达到亚融合状态，无血清培养基培养12 h。按分组要求加入不同浓度UA、培养基，使各瓶终体积均为2 ml。12 h后收集细胞，进行下列测定。
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