脂联素重组体对人子宫内膜癌细胞系RL95-2侵袭及转移的影响(2)
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参见附件。
1.4以Transwell小室实验观察RA对肿瘤细胞侵袭能力的影响在Transwell小室滤膜(8um孔径)上、下表面分别铺以10 g的ECM胶和5 g的纤连蛋白(FN)，ECM胶用50 μl培养液重建1 h后备用。选用对数生长期的RL95-2细胞，经上述浓度lRA分别处理24 h，重悬于含0.1%BSA的DMEM-F12培养液中，每小室中加入5×105个细胞，37 ℃、5% CO2孵箱培养10 h。HE染色，统计侵袭细胞数目。实验重复3次，计算细胞侵袭抑制率。抑制率(%)=(对照组侵袭细胞数一给药组侵袭细胞数)/对照组侵袭细胞数×100%。
1.5体外细胞迁移实验观察RA对肿瘤细胞迁移能力的影响分别用上述浓度RA处理处于对数生长期的RL95-2细胞24 h，重悬于含0.1% BSA的DMEM-F12培养液中，每小室中加入5.0×105个细胞，37 ℃、5% CO2孵箱培养10 h。HE染色，200倍光镜下计数5个不同视野(上、下、左、右、中)的迁移细胞数,取平均值。上述实验重复3次。
1.6统计学处理计量资料以(x±s)表示，应用SPSS 11.0软件分析数据，对实验结果进行单因素方差分析。
2结果
2.1RA对肿瘤细胞增殖活性的影响通过MTT实验观察到：各组OD492值随着质量浓度的增大而减小，抑制率介于20.06%~83.12%之间。当RA浓度大于5.0 μg/ml时，明显的抑制肿瘤细胞的生长。各实验组与对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01)。见图1。
图1RA对细胞增殖活性的影响
2.2RA对肿瘤细胞黏附能力的影响通过黏附实验观察到：RA能抑制RL95-2细胞对FN和ECM 的粘附能力，OD546分别介于0.356~0.147和0.380~0.126之间。脂联素浓度大于5.0 μg/ml时，能明显抑制肿瘤细胞对ECM的能力，而对FN粘附能力的抑制作用则在浓度大于10 μg/ml时才显现。各实验组与对照组相比 ......
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