高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究
【摘要】 高速逆流色谱是近几年发展起来的新型色谱技术，由于其独特之处已被广泛应用于各个领域，本文就人们关心的热点中药有效成分的分离，采用新的色谱技术高速逆流色谱技术分离取得的成就进行总结，并展望未来的前景。
【关键词】 高速逆流色谱法； 中药有效成分； 分离； 应用
中图分类号 R283 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2012)35-0156-01
近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。高速逆流色谱法(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。
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1 工作原理
高速逆流色谱HSCCC是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，UV-VIS(紫外-可见光检测器)、ELSD(蒸发光散射检测器)或者质谱检测器等[2]。
2 中药的有效成分
各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。
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3 高速逆流色谱分离各类中药有效成分
3.1 生物碱类
中药的有效成分中生物碱是重要的一类化学成分，其中的天然含氮化合物是重要的疾病治疗和药物发展的物质。在植物中生物碱分布广泛，是中药的活性成分之一[3]。因其分子结构复杂，具有强烈的生理活性，并且多种生物碱并存，给分离有效成分造成困难。生物碱类成分分离应用高速逆流色谱的流动相为氯仿—甲醇—水系。应用高速逆流色谱分离的有：茶叶中分离得到咖啡碱，茶碱；弥勒獐牙菜中分离得到龙宁胆碱；红河青叶胆生物碱中分离得到龙胆碱；黄柏中分离得到小檗碱；黄连中分离得到小檗碱，表小檗碱，黄连碱，巴马亭；苦参中分离得到苦参碱；附子中分离得到新乌碱等等。
3.2 黄酮类
中药中的有效成分黄酮类化合物大部分与糖形成苷，以苷的形式存在，少部分已游离态存在。黄酮苷类成分分离应用高速逆流色谱的流动相为正己烷—乙酸乙酯—正丁醇—甲醇—水系统或者游离的黄酮类分离应用氯仿—甲醇—-水体系。应用高速逆流色谱分离的有Pueraria lobata 中分离得到的异黄酮苷、葛根素木糖苷、葛根素、3c-甲氧基葛根素、3c-羟基葛根素；大豆中分离得到的异黄酮苷、染料木苷、60—O—丙二酰异黄酮苷、60—O—丙二酰染料木苷；银杏叶中分离得到的山奈酚、异鼠李素、槲皮素。中药甘草具有缓急止痛、清热解毒、调和诸药的功效；现代药理研究认为甘草中的黄酮类有抗肿瘤作用。有学者应用HSCCC从甘草中分离出纯度95%以上甘草黄酮素、甘草异黄酮甲、甘草素、芒柄花素4种黄酮类成分，所用溶剂系统浓度比例为正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水为1∶2∶1∶1。
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3.3 苷类
中药中的有效成分苷类化合物的分离应用氯仿—甲醇—水系或者乙酸乙酯—正丁醇—水体系。应用高速逆流色谱分离的有，虎杖中分离得到白藜芦醇和白藜芦醇苷；刺五加中分离得到的刺五加苷。有学者应用HSCCC从人参中分离得到单体皂苷3个和混合组分1个，所用溶剂为醋酸乙酯∶正丁醇∶水∶醋酸为4∶1∶3∶0.02。
3.4 萜类
中药中的有效成分萜类的分离应用氯仿—甲醇—水—正己烷—乙酸乙酯—乙醇—水体系。应用高速逆流色谱分离的有：鼠尾草中分离得到的隐丹参醌、丹参酮；紫杉中分离得到的紫杉醇及类似物；从银杏叶中分离得到的白果内酯；从穿心莲中分离得到的穿心莲内酯、新穿心莲内酯。
3.5 蒽醌类
中药中蒽醌类成分有泻下、抗菌、抗癌作用。应用高速逆流色谱分离的有芦荟中分离得到大黄素苷、芦荟大黄素；大黄中分离得到大黄素；从茜草、虎杖及决明子分离得到蒽醌类活性成分。
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4 总结
现代中药的应用得到了国内外各界的好评，但对于成分复杂的中药有效成分的分离将是一个艰难的过程。HSCCC的应用给中药的分离提取带来了十分广阔前景，实现了提取、分离、结构分析的自动化。综上，HSCCC技术在中药有效成分的分离中可发挥巨大的作用。
参考文献
[1]李爱峰，刘宁宁，柳仁民.高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展[J].理化检验：化学分册，2008，44(5)：481-489.
[2]辛莉，施江，刘素云，等.高速逆流色谱及其在天然产物分离中的研究进展[J].食品工业科技，2009，30(11)：335.
[3]卢艳花.中药有效成分分离提取技术[M].北京：化学工业出版社，2008：40-43.
(收稿日期：2012-08-07) (编辑：王春芸), 百拇医药(郭江宁)
【关键词】 高速逆流色谱法； 中药有效成分； 分离； 应用
中图分类号 R283 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2012)35-0156-01
近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。高速逆流色谱法(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。
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1 工作原理
高速逆流色谱HSCCC是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，UV-VIS(紫外-可见光检测器)、ELSD(蒸发光散射检测器)或者质谱检测器等[2]。
2 中药的有效成分
各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。
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3 高速逆流色谱分离各类中药有效成分
3.1 生物碱类
中药的有效成分中生物碱是重要的一类化学成分，其中的天然含氮化合物是重要的疾病治疗和药物发展的物质。在植物中生物碱分布广泛，是中药的活性成分之一[3]。因其分子结构复杂，具有强烈的生理活性，并且多种生物碱并存，给分离有效成分造成困难。生物碱类成分分离应用高速逆流色谱的流动相为氯仿—甲醇—水系。应用高速逆流色谱分离的有：茶叶中分离得到咖啡碱，茶碱；弥勒獐牙菜中分离得到龙宁胆碱；红河青叶胆生物碱中分离得到龙胆碱；黄柏中分离得到小檗碱；黄连中分离得到小檗碱，表小檗碱，黄连碱，巴马亭；苦参中分离得到苦参碱；附子中分离得到新乌碱等等。
3.2 黄酮类
中药中的有效成分黄酮类化合物大部分与糖形成苷，以苷的形式存在，少部分已游离态存在。黄酮苷类成分分离应用高速逆流色谱的流动相为正己烷—乙酸乙酯—正丁醇—甲醇—水系统或者游离的黄酮类分离应用氯仿—甲醇—-水体系。应用高速逆流色谱分离的有Pueraria lobata 中分离得到的异黄酮苷、葛根素木糖苷、葛根素、3c-甲氧基葛根素、3c-羟基葛根素；大豆中分离得到的异黄酮苷、染料木苷、60—O—丙二酰异黄酮苷、60—O—丙二酰染料木苷；银杏叶中分离得到的山奈酚、异鼠李素、槲皮素。中药甘草具有缓急止痛、清热解毒、调和诸药的功效；现代药理研究认为甘草中的黄酮类有抗肿瘤作用。有学者应用HSCCC从甘草中分离出纯度95%以上甘草黄酮素、甘草异黄酮甲、甘草素、芒柄花素4种黄酮类成分，所用溶剂系统浓度比例为正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水为1∶2∶1∶1。
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3.3 苷类
中药中的有效成分苷类化合物的分离应用氯仿—甲醇—水系或者乙酸乙酯—正丁醇—水体系。应用高速逆流色谱分离的有，虎杖中分离得到白藜芦醇和白藜芦醇苷；刺五加中分离得到的刺五加苷。有学者应用HSCCC从人参中分离得到单体皂苷3个和混合组分1个，所用溶剂为醋酸乙酯∶正丁醇∶水∶醋酸为4∶1∶3∶0.02。
3.4 萜类
中药中的有效成分萜类的分离应用氯仿—甲醇—水—正己烷—乙酸乙酯—乙醇—水体系。应用高速逆流色谱分离的有：鼠尾草中分离得到的隐丹参醌、丹参酮；紫杉中分离得到的紫杉醇及类似物；从银杏叶中分离得到的白果内酯；从穿心莲中分离得到的穿心莲内酯、新穿心莲内酯。
3.5 蒽醌类
中药中蒽醌类成分有泻下、抗菌、抗癌作用。应用高速逆流色谱分离的有芦荟中分离得到大黄素苷、芦荟大黄素；大黄中分离得到大黄素；从茜草、虎杖及决明子分离得到蒽醌类活性成分。
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4 总结
现代中药的应用得到了国内外各界的好评，但对于成分复杂的中药有效成分的分离将是一个艰难的过程。HSCCC的应用给中药的分离提取带来了十分广阔前景，实现了提取、分离、结构分析的自动化。综上，HSCCC技术在中药有效成分的分离中可发挥巨大的作用。
参考文献
[1]李爱峰，刘宁宁，柳仁民.高速逆流色谱原理及其在天然产物化学成分分离中的应用研究进展[J].理化检验：化学分册，2008，44(5)：481-489.
[2]辛莉，施江，刘素云，等.高速逆流色谱及其在天然产物分离中的研究进展[J].食品工业科技，2009，30(11)：335.
[3]卢艳花.中药有效成分分离提取技术[M].北京：化学工业出版社，2008：40-43.
(收稿日期：2012-08-07) (编辑：王春芸), 百拇医药(郭江宁)