海马中突触体相关蛋白在学习记忆中的作用研究(2)
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1.3 Y-迷宫分辨学习实验
1.3.1 实验方法 实验主要分为学习训练及测试、记忆再现测试两大部分，在三等分辐射式迷宫中进行。(1)学习能力实验方法。实验开始后，如果大鼠直接跑到安全区域内，则为正常。对大鼠每天进行20次由起始臂起跑的训练，坚持1周。当大鼠的正常反应率达到90%以上，为学会的标准。(2)记忆能力测试方法。将反应正常的大鼠挑选出来，待24 h后，再去做以上测试。尝试次数以及记忆正确率达到90%以上为记忆再现能力。实验中，将大鼠的尝试次数、正确反应次数等相关信息做好详细的记录。
1.3.2 脑组织蛋白的提取 第一步，将已经培育好的皮层神经细胞取出；第二步，分为小组，每8孔为一小组，白细胞介素-1β试验共分为6组；第三步，将白细胞介素-1β的浓度设定为0、0.01、0.1、1、10、100；NMDA实验分为6组，其浓度分别为0、10、50、100、200、400；第四步，经过上步不同浓度的试验，最终选择适宜的浓度进行下步试验[4]。
1.3.3 测定细胞生存力 细胞生存力的测定采用MTT比色法，通过上步中经过白细胞介素-1β与NMDA处理之后的细胞，在每一孔中加入5 g/L的MTT液，置于37 ℃的孵箱中连续孵育4 h，然后将其取出，将培养液丢弃，在每一孔中加入150 μl的DMSO，在微量混匀器中充分混匀，达到酶标仪570 mm位置读取吸光度[5]。
1.3.4 免疫荧光分析 利用Annexin V免疫荧光与PI分别观察细胞凋亡、细胞坏死[6]。
1.4 统计学处理
实验所得数据采用SPSS 20.0统计软件进行分析，计量资料采用t检验，计数资料较采用字2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组大鼠Y-迷宫分辨学习行为比较
幼年组达标所需的训练次数大于老年组，且老年组的学习正确率比幼年组高，但幼年组的记忆正确率高于老年组，也就是说，老年组学习能力较幼年组强，但由于年龄差异造成老年组大鼠记忆能力下降较为明显，表明不同年龄大鼠空间分辨学习能力和记忆能力存在差异 ......
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