线性免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测抗核抗体的比较分析研究(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2012年1月1日-2013年6月30日于笔者所在医院同时采用免疫印迹法(LIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗核抗体(ANA)的3014例患者，其中男1049例，年龄17～80岁，平均(40.5±4.1)岁；女1965例，年龄3～86岁，平均(43.0±1.8)岁。其中2013年3月-2013年6月收治的AID患者123例设为AID组，男52例，女71例，年龄17～70岁，平均(45.7±4.1)岁。其中包括系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征等。AID患者的诊断均符合国际相关学会的诊断标准。其中无明显心血管、肝、肾疾病，无结缔组织病病史的健康体检人群80例设为健康组，男34例，女46例，年龄19～60岁，平均(38.2±4.1)岁。检测标本均为血清标本。AID组和健康组用于计算两组检测方法的特异度和敏感度，比较两种方法的检测效能。
1.2 试剂和检测仪器
试剂：酶联免疫吸附法(ELISA)和线性免疫印迹法(LIA)所用试剂盒分别为德国欧蒙公司ELISA法检测抗核抗体试剂盒和抗核抗体谱(IgG)检测试剂盒(免疫印迹法)。ELISA法的主要检测总抗核抗体，LIA法的检测膜条上包被以下10种特异性抗原，包括抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Sm、抗Scl-70、抗nRNP、抗着丝点抗体、核小体、组蛋白和核糖体P蛋白。仪器：酶联免疫吸附法(ELISA)使用安图生物全自动酶免分析仪检测ANA酶标反应板的吸光度(OD)值。免疫印迹法(LIA)检测ANAs采用德国欧蒙公司的免疫印迹自动操作仪(EUROIMMUN AG)和EURO Line Scan软件进行显色结果扫描分析。
1.3 方法
抽取患者外周静脉血3～5 ml，3500 r/min离心5 min分离血清，3 d内完成检测。两种方法均严格按照说明书操作。酶联免疫吸附法(ELISA)的操作流程：待测血清1∶101稀释加入ELISA板孔内第一次温育30 min，专用洗液洗涤3次，加入酶结合物温育30 min，同样洗涤3次后加底物温育显色15 min，加终止液终止反应后酶标仪比色 ......
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