半枝莲多糖对胃癌细胞SGC—7901的细胞活性影响(2)
1.2 方法
1.2.1 半枝莲多糖的制备 取半枝莲粗多糖干燥粉末按照1∶4的比例在45 ℃温水中浸提2 h。加入4倍体积95%乙醇搅拌,室温静置6 h,离心(12000 rpm,15 min)收集沉淀;沉淀经乙醚去脂、氨水脱色、三氯乙酸法脱蛋白,重复实验并以硫酸-苯酚法跟踪检测,保证多糖含量在90%以上。将沉淀用蒸馏水溶解,在液氮中冷冻8 h后取出,用冻干机冷冻48 h,取出冻干粉,将冻干粉溶于适量蒸馏水中,用无菌滤膜过滤器过滤除菌两次,收集滤液并计算浓度,过滤过程采用无菌操作。
1.2.2 细胞培养 用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养SGC-7901胃癌细胞株,在37 ℃、5%CO2环境下的细胞培养箱中进行传代。取呈对数生长的细胞用于实验。
1.2.3 半枝莲多糖对细胞生长的影响 将对数生长的SGC-7901胃癌细胞用胰酶(EDTA)消化后制备细胞悬液,并将其以每孔细胞浓度为5×103个接种于96孔细胞培养板中,培养24 h使细胞充分贴壁。种板后在已接种的孔内加入不同浓度的半枝莲多糖(SBP)溶液,并使孔中药物质量浓度分别达到20、10、5、2.5 μg/ml,RPMI-1640培养基为阴性对照组 ......
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