赵伟，马英，孔申嘉，张建业

    青海省交通医院，青海 西宁 810000

    肝癌是常见的恶性肿瘤，有极高的发病率和致死率，临床治疗以化疗为主，但治疗过程中容易出现药物抵抗，导致化疗效果欠佳[1-2]。二甲双胍(metformin，MET)是一种广泛运用于治疗糖尿病的药物，具有良好的治疗效果和较高的安全性，但近几年研究显示，MET还具有抗肿瘤作用[3-5]。大车前草是传统藏药，具有保肝利尿、止热解毒的功效，主要含黄酮类、苯乙醇苷类及甾醇类化合物，其中，苯乙醇苷类化合物具有抗氧化、抗炎的活性[6-7]。据报道，大车前苷(plantamajoside，PMS)可抑制胶质瘤细胞U-251MG增殖、侵袭及裸鼠成瘤[8]，但PMS是否可用于治疗肝癌还不清楚，故本文旨在研究PMS联用MET对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡和自噬的影响，为肝癌治疗联合用药提供依据。

    1 材料

    1.1 细胞株肝癌细胞HepG2购自上海青旗生物技术发展有限公司，货号：BFN60800692，含STR鉴定报告，于液氮罐中保种保存。

    1.2 药物与试剂盐酸二甲双胍片(天津太平洋制药有限公司，国药准字：H12020797)。PMS(四川维克奇生物科技有限公司，纯度≥98%，CAS号：104777-68-6)；3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA，美国MCE公司，货号：HY-19312)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、杜氏培养基(dulbecco′s modified eagle medium，DMEM)、胰蛋白酶(美 国Gibco公 司，货 号：16140063、31331093、25200072)；溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU)试剂盒(武汉艾美捷科技有限公司，货号：AAT-17030)；赫斯特(Hoechst)染色液、抗荧光淬灭封片液、BeyoRTTMII cDNA第一链合成试剂盒、BeyoFastTMSYBR Green qPCR Mix试剂盒、放射免疫沉淀法裂解缓冲液(radio immunoprecipitation assay lysis buffer，RIPA)(上海碧云天生物科技有限公司，货号：C1017、P0126、D7168S、D7260、P0013B)；脂质体(Lipofectamine)3000转染试剂盒、Trizol裂解液(美国Thermo Fisher Scientific公司，货号：L3000008、15596018)；二喹啉甲酸(bicinchoninic acid ......