大蒜素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究*
培养液,划痕,血清,1材料,2方法,3结果,4讨论
李雯静,黄丽雯武汉科技大学附属天佑医院,湖北 武汉 430064
支架内再狭窄是经血管介入治疗后的一种常见并发症[1]。据统计,在血管介入治疗并成功植入药物洗脱支架的心脑血管疾病患者中,支架内再狭窄发生率约为10%[2]。支架内再狭窄的病理进程中,位于血管中膜的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的迁移和增殖发挥着重要的作用[3]。VSMC在细胞因子及炎症因子等的诱导下,从血管中膜迁移至内膜并进行大量增殖从而引起内膜新生是支架内再狭窄发生的重要机制之一[4]。因此,有效抑制VSMC迁移是预防支架内再狭窄的有效方法。大蒜素是大蒜的主要活性成分,具有多种生物学活性。研究发现,大蒜素在抑制炎症反应及抗肿瘤细胞迁移等方面具有显著作用[5-7]。动物实验显示,大蒜素可以减轻支架内再狭窄[8-9],但其作用机制却未见报道。因此,本研究旨在从NF-κB信号通路出发阐明大蒜素发挥抑制血管再狭窄的作用机制。
1 材料
1.1 动物4周龄SPF级SD雄性大鼠5只,体质量100~140 g,购自湖北省实验动物中心,许可证号:SCXK(鄂)2015-0018,饲养于SPF级环境中,温度为25℃,相对湿度为50%,12 h光照/12 h黑暗,噪音在80 dB以下。本研究已获得武汉科技大学附属天佑医院伦理委员会批准,批准编号:WKDTY20190703。
1.2 药物与试剂大蒜素(纯度≥98%,德国默克公司,货号:17795-26-5);脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、BCA蛋白浓度检测试剂盒、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记山羊抗兔IgG(H+L)抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)兔单克隆抗体、平滑肌细胞标志蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM-actin)兔多克隆抗体、极超敏ECL化学发光试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司,货号:ST1470、P0010S、A0208、AF1186、AF0048、P0018FS);细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8,日本同仁化学研究所,货号:CK04);核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)兔单克隆抗体、p-NF-κB p65兔单克隆抗体(美国CST公司 ......
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