基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响*
抑制率,激动剂,抑制剂,1材料,2方法,3结果,4讨论
朱海洋,孙会卿,张淑凤,吴贺文1.郑州大学第五附属医院,河南 郑州 450052;2.河南省人民医院,河南 郑州 450003
肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,发病人数逐年增加,具有极高的发病率及病死率且易复发转移,预后极差,严重危害人类生命健康[1]。自噬是广泛存在于真核细胞内的一种分解细胞质等自身构成成分的生理现象,当自噬激活时,自身受损的细胞器及大分子物质被包裹在囊泡中,传递至溶酶体进行降解。研究表明,自噬与肿瘤、免疫性疾病及神经退行性疾病等多种疾病的发生发展过程密切相关,在HCC的进展过程中也发挥着重要作用,可促进肿瘤细胞发生凋亡或坏死,抑制肿瘤发展[2-4]。双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素的衍生物,具有水溶性好、吸收迅速、代谢快、不良反应小等优点,除具有抗疟作用外,还具有抗炎、免疫调节等多方面药理作用[5-7]。近年来的研究发现,DHA还具有抗肿瘤活性,对肺癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞有显著抑制作 用[8-9]。DHA具 有 诱 导 肝 癌 细 胞 凋 亡 的 作用[10],但其是否通过调节自噬抑制肿瘤的发生发展尚不清楚。因此,本研究基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究DHA对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的作用,以期为临床治疗HCC提供理论参考。
1 材料
1.1 细胞系人肝癌SMMC-7721细胞,购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库,目录号:RKX1036。细胞培养于含有10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素及100 mg·L-1链霉素的RPMI 1640培养基中,37℃、5%CO2培养箱内常规培养。选择生长状态良好的细胞,加入冻存培养基,置于-80℃冰箱,第2天转至液氮中保存。
1.2 药物与试剂双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA,成都瑞芬思生物科技有限公司,纯度>98%,货号:S-102)。胎牛血清、青霉素(纯度≥97%)、链霉素(纯度≥98%)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、MTT、二甲基亚砜、戊二醛溶液(美国Sigma-Aldrich公司,货号:12103C、19532、85886、189490、M2128、D5879、G5882);0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司,货号:25200072);乙醇(纯度≥99.5%)、丙醇(纯度≥99.9%)、柠檬酸铅(上海阿拉丁生化科技股份有限公司,货号:E111994、P110345、L303843);细胞自噬染色试剂盒(MDC法)、ECL化学发光法检测试剂盒(北京索莱宝科技有限公司 ......
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