彭福梅，尹青桥，李相友

    武汉市第三医院，湖北 武汉 430060

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)属于糖尿病常见并发症，随疾病发展极易导致慢性肾衰竭，威胁患者生命安全[1]。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ech-associated protein 1，Keap1)可在生理状态下与核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2)发生耦联，当机体发生病理性改变时，Keap1水平也会发生相应变化[2]。Nrf2参与细胞氧化还原平衡调节，已有报道指出，激活Nrf2可有效治疗DN导致的肾损伤[3]。研究指出，Keap1可被Nrf2激活，进而影响miR-142表达[4]。黄芩甲苷为中药黄芩中提取的有效成分，具有抗氧化、消炎、抑菌等作用[5]。本次研究通过分析黄芩甲苷对糖尿病小鼠肾损伤以及小鼠肾小球系膜细胞的影响，探究Nrf2/Keap1信号通路在黄芩甲苷治疗DN肾损伤中的作用。

    1 材料

    1.1 实验动物与细胞60只SPF级雌性C57BL/6小鼠，购买于南京军科生物工程有限公司，8～10周龄，体质量25～30 g，饲养在室温23 ℃、12 h/12 h光暗周期条件下，自由饮水采食，饲养1周后用于实验。小鼠肾小球系膜细胞系(SV40-Mes-13)由中国科学院生物化学与细胞生物学研究所提供，选择DMEM培养基进行细胞培养，温度37 ℃，二氧化碳体积分数5%。

    1.2 药物与试剂RPMI 1640培养基(美国Invitrogen公司，批号：20200516)；2，2-联喹啉-4，4-二甲酸二钠(butyleyanoacrylate，BCA)蛋白分析试剂盒(福州飞净生物科技有限公司，批号：20200317)；细胞溶解缓冲液(武汉纯度生物科技有限公司，批号：20200412)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力测定试剂盒(德国Qiagen公司，批号：20190921)；小鼠单克隆Nrf2抗体、Keap1抗体、血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)抗体(美国Abcam 公司，货号：ab89443、ab89563、ab89652)；RNA提取试剂盒(广州双螺旋基因技术有限公司，批号：200423)；反转录试剂盒(上海科博瑞生物科技有限公司，批号：210214)；对照组病毒(LV-control)、过表达Keap1慢病毒(LV-Keap1)购于擎科生物科技有限公司；miR-142 mimic、miR-142 inhibitor、si-Keap1、pcDNA-Keap1及对照物pre-NC、NC、si-control、pcDNA购自吉玛基因公司 ......