耐多药大肠埃希菌质粒介导的耐药基因检测(2)
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2 结果
2.1 耐药菌株的检出情况 通过K-B法药敏试验，71株大肠埃希菌,死亡一株，其中全敏6株，占8.57%;单耐16株，占22.86%; 双耐18株，占26.71%; 多耐 30株, 占42.86%。
2.2 PCR 产物电泳分析 2%琼脂糖凝胶电泳结果，发现有9株扩增出891bp大小的条带，有19株扩增出876bp大小条带,有11株扩增出1032bp大小的条带，有1株扩增出875bp大小条带, 有23株扩增出436bp大小的条带，有21株扩增出908bp大小条带,标准菌株未见阳性条带。
注:1: Marker 2: ATCC25922 7:SHV
注:1:Marker 4 .5.6.7: TEM
注:1,marker(bp) 2,CTX-M-22
注:1,marker (bp) 2,3,4,5 CTX-M-24
注：1，marker(bp) 2,ATCC25922 3,4,5 阴性菌株 6,8 CTX-M 7,CTM-X-3
2.3 测序 阳性条带经基因测序仪检测,与已知的CTX-M-22、CTX-M-2、，TEM、SHV、CTX-M、CTX-M-3相比较，9株891bp条带为CTX-M-22，24株876bp条带为CTX-M-24。CTX-M-22，CTX-M-24两种基因均含有的6株； 11株1032bp条带为TEM，1株875bp条带为SHV；23株436bp条带为CTX-M，21株908bp条带为CTX-M-3。 CTX-M ，CTX-M-3两种基因均含有的有12株。
3 讨论
泸州地区大肠埃菌耐多药普遍，在耐多药中存在质粒介导的耐药性。本研究检测发现质粒中有CTX-M-22，CTX-M-24，TEM，SHV，CTX-M，CTX-M-3六种耐药基因，含有CTX-M-24，TEM的有1株，含有CTX-M，SHV的有1株;有2株含有CTX-M,CTX-M-22;有2株含有CTX-M-3,CTX-M-24;有6株含有CTX-M-24,CTX-M;有3株含有CTX-M-22,CTX-M;含有CTX-M,CTX-M-3的有12株。有1株含有CTX-M,CTX-M-22,TEM三种基因。有4株含有4种不同耐药基因，有1株居然含有5种耐药性基因，3株未发现上述六种耐药性质粒。其余每种菌株均含有2种或者2种以上的耐药性基因。药敏试验表明：70株大肠埃希菌对常见氨基糖苷类，喹诺酮类抗生素，半合成青霉素，体外实验表现有广泛的耐药性。试验菌株以多耐占绝大多数，多耐菌株对第三代头孢菌素中的头孢唑肟(CFX)敏感，其他第三代头孢菌素头孢曲松(CFT)、头孢哌酮(CPZ)、头孢他定(CAZ)，氨基糖苷类中的丁胺卡那霉素(AMK)中度敏感，对亚胺培南(IPM)，美罗培南敏感(MPM)。
近年，在韩国首尔的一所医科大学研究发现大肠埃希菌中质粒介导的耐药基因CTM-M-22[3],还有我国在猪农场中[4]和其他细菌中也发现[5]这种耐药基因。越南胡志明市的热带病医院发现CTM-M-24[6],加拿大的卡尔加里也发现了CTM-M-22,CTM-M-24两种耐药种质粒[7]。去年，中国安徽发现质粒介导的CTM-M [8]，广州也发现质粒介导耐药基因CTM-M-3 [9]，近几年巴黎的德尼大学和英国伦敦疾病控制机构也发现这两种质粒[10][11]。今年，土耳其的两所教学医院在本院病人标本研究中发现质粒介导的TEM,SHV两种耐药基因[12][13]。可见，大肠埃希菌的质粒介导的耐药性全世界普遍存在，本地菌株也发现这六种耐药性质粒。
大肠埃希菌的耐药机制广泛，主要是产生灭活酶、细胞壁的改变、主动外排以及作用靶位结构的改变。随着广谱抗生素、第三代头孢菌素及β内酰胺类抗生素的广泛应用和不加限制使用，使耐药菌株不断产生。近年来发现更重要的是产生了耐药性质粒，且大肠埃希菌将耐药性质粒代代相传，还可以接受外源性的耐药性，有的菌株不仅一种甚至多种耐药性质粒共存。大肠埃希菌的耐药性在同种属甚至不同种属细菌的质粒之间或者质粒与染色体间不断转移 ......
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