茶藨子叶层孔菌(忍冬)活性成分研究
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【摘要】目的 研究茶藨子叶层孔菌(忍冬)的活性成分；使用API4000液相色谱串联质谱仪、二元高压梯度泵，G1315B agilent DAD检测器，YQ-1007C超声波清洗器，DT-230A色谱柱柱温箱等仪器对金银花和茶藨子叶层孔菌(忍冬)进行图谱分析；结果 茶藨子叶层孔菌(忍冬)含有多种和金银花内相似的化学物质，其中绿原酸就是其中的一种；结论 除绿原酸外，在茶藨子叶层孔菌(忍冬)内还含有其他活性成分。
【关键词】茶藨子叶层孔菌(忍冬) 金银花 活性成分 研究
随着生物化学以及现代药理学不断发展，对传统中药材活性成分的研究得到了一定的进展。在中药材中发现的有机酸类、黄酮类等活性成分对于当前癌症、血栓、艾滋病、基因突变等疾病具有较好的拮抗作用。茶藨子叶层孔菌(Phylloporia ribis)属于锈革孔菌科(Hymenochaetales)褐孔菌属真菌。由于茶藨子叶层孔菌寄生在忍冬茎基部，因此又叫忍冬蛾子。除能够治疗口腔类疾病外，茶藨子叶层孔菌还对癌症、炎症等疾病具有明显的拮抗作用，同时茶藨子叶层孔菌还能够有效提高机体的免疫力。但是，国内外对于该菌的活性成分的报告尚不多见，研究茶藨子叶层孔菌(忍冬)的活性成分，对于开发茶藨子叶层孔菌(忍冬)的药用价值具有十分重要的现实意义。
1 仪器与材料
1.1 仪器
API4000液相色谱串联质谱仪、二元高压梯度泵(美国应用生物系统公司 )，G1315B agilent DAD检测器，YQ-1007C超声波清洗器(上海易净超声波仪器有限公司)，DT-230A色谱柱柱温箱(杭州赛析科技有限公司)。
1.2 药品
乙酸(CH3COOH)、甲醇(CH3OH)、朱砂莲甲素(C15H10O5)、芦荟泻素(C15H10O5)、绿原酸(C16H18O9)、青兰苷(C21H20O11)、茶单宁(C15H14O6)、金丝桃苷(C21H20O12 )。
1.3实验药材
金银花：2011年5月底，采集于山东聊城；茶藨子叶层孔菌(忍冬)：2011年9月底，采集于山东省聊城。上述两种实验药材进行干燥、粉碎备用。
2 实验过程
2.1 LC—MS实验
2.1.1 制备供试溶液
分别取干燥、粉碎备用的金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)2份，各2.0g，进行精密测量后，分别转移至锥形瓶中，然后分别加入50%与70%的甲醇溶液40ml，并进行20min的超声提取，3000r/min离心处理5min，残留物重复操作1次，将两次上清液进行混合浓缩，冷却。分别使用50%与70%的甲醇溶液定容至50ml，充分混合后使用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，收集滤液，就可以分别得到金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)有机酸组以及黄酮组的供试溶液。
2.1.2 图谱制定并比较
取上述制备好的供试溶液进行有机酸组以及黄酮组实验分析，分别得到金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)有机酸组以及黄酮组的供试溶液图谱。然后对金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)有机酸组图谱进行比较分析，对金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)黄酮组图谱进行比较分析。
通过金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)有机酸组以及黄酮组的供试溶液图谱比较分析发现，二者有机酸组图谱极其相似，黄酮组图谱极其相似。通过图谱分析，我们发现，在条件相同的情况下，金银花、茶藨子叶层孔菌(忍冬)存在着许多种成分相同的有机化学成分。
2.2 HP LC—MS实验
2.2.1 制备供试溶液
分别取干燥、粉碎备用茶藨子叶层孔菌(忍冬)5份，精密称量，每份2.0g，分别转移至锥形瓶中，然后分别加入蒸馏水、乙酸乙酯、石油醚、正丁醇各40ml，并进行20min的超声提取，3000r/min离心处理5min，残留物重复操作1次，将两次上清液进行混合，水浴蒸干。以甲醇为溶剂进行溶解并转移至50ml容量瓶中定容，充分混合后使用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，收集滤液，就可以得到茶藨子叶层孔菌(忍冬)蒸馏水、乙酸乙酯、石油醚、正丁醇提取物的供试溶液。
2.2.2 制备对照溶液
分别取朱砂莲甲素大黄素、芦荟泻素、绿原酸、青兰苷、茶单宁、金丝桃苷等适量，精密称量，分别转移至容量瓶中，然后分别加入50%与70%的甲醇溶液配置成质量分数为1.0mg/ml的对照溶液；然后再分别取上述对照溶液各1ml，转移至10ml量瓶，分别使用50%与70%的甲醇溶液配置成质量分数为0.1mg/mld的混合对照溶液。
通过比较分析发现，发现茶藨子叶层孔菌(忍冬)的乙酸乙酯提取液的高效液相色谱质谱检测图谱和对照溶液中绿原酸高效液相色谱质谱检测图谱极其相似，说明茶藨子叶层孔菌(忍冬)含有绿原酸。
3 讨论
通过研究发现茶藨子叶层孔菌(忍冬)和金银花存在着许多相同的有机化合物，在60min内，茶藨子叶层孔菌(忍冬)有机酸条件下的图谱和金银花有机酸条件下的图谱，从时间上和物质图谱上对于关系非常明确；在70min内，茶藨子叶层孔菌(忍冬)黄酮条件下的图谱和金银花黄酮条件下的图谱 ......
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