结核感染T细胞斑点试验在疑似结核患者诊断中的应用
摘要：目的：比较结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT. TB)和结核抗体试验(TB-Ab)在疑似结核患者诊断中的敏感性和特异性，探讨两者在结核感染中的诊断价值。方法：对疑似结核的74例患者进行前瞻性研究，分别采用T-SPOT. TB和TB-Ab试验，比较二者对结核诊断的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)和阴性似然比(LR-)。结果：74例疑似结核患者确诊结核52例。T-SPOT. TB试验在敏感性、特异性、PPV、NPV等方面显著优于TB-Ab(P<0.05)；T-SPOT. TB的LR+值明显高于TB-Ab，LR-值明显低于TB-Ab。结论：T-SPOT. TB试验是诊断结核的快速敏感方法，显著优于结核抗体试验(TB-Ab)，更适于作为结核筛检试验，在结核疾病诊断中有着重要价值。
关键词：结核；结核感染T细胞斑点试验；结核抗体试验
结核病的快速诊断是结核病防控工作中的一个难题，我国近年来结合感染率有上升趋势，结核抗体试验(TB-Ab)对于活动性结核的诊断价值低。结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT. TB)即γ干扰素释放试验是一种结核诊断的新方法，这种试验采用酶联免疫斑点方法定量检测外周血单核细胞在结核菌特异性抗原刺激下释放γ干扰素的水平，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染以及结核病。本研究采用T-SPOT. TB和TB-Ab两种检测方法在疑似结核病人中进行对比研究，探讨二者在结核诊断中的敏感性和特异性。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 一般资料：2011年8月至2014年8月在我科住院疑似或待排结核患者74例，在其他详细检查基础上同时行T-SPOT. TB检测和TB-Ab检测。
1.2 方法：⑴T-SPOT. TB试验：根据T-SPOT. TB试剂盒(上海复兴医药股份有限公司)的说明书进行以下步骤：分离外周血单核细胞，与结核特异性抗原相对分子质量为6000的早期分泌抗原靶和相对分子质量为10000的培养滤液蛋白在抗γ-干扰素抗体预包被的板中共同孵育，37℃放置16-20小时。经碱性磷酸酶偶联的二抗和底物显色后用酶联免疫吸附试验自动读板仪(德国AID公司)对斑点进行计数，并按照说明书的判断标准进行结果判定。⑵TB-Ab试验：根据TB-Ab试剂盒(三明博峰生物科技有限公司)的说明，采用酶联免疫吸附试验检测患者血清中抗纯蛋白衍生物(PPD)抗体。⑶根据以下标准，将患者分为：a.结核性疾病，包括肯定结核性疾病：结核分枝杆菌培养阳性；疑似结核性疾病：结核分枝杆菌培养阴性，但临床表现、影像学或病理学检查支持结核，且抗结核治疗有效；b.非结核性疾病：临床表现明确系其他疾病所致，或者经其他治疗(非抗结核治疗)病情改善。⑷评价指标：采用敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)和阴性似然比(LR-)等作为诊断试验的评价指标。
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1.3 统计学方法：检测结果以x±s表示，采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 T-SPOT. TB与TB-Ab阳性率比较：
74例患者同时行T-SPOT. TB检测和TB-Ab检测，T-SPOT. TB检测在结核性疾病的阳性率显著优于TB-Ab检测，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 T-SPOT. TB与TB-Ab评价指标比较：
T-SPOT. TB的敏感性、特异性、PPV、NPV等均显著高于TB-Ab(P<0.05)；T-SPOT. TB的LR+值明显高于TB-Ab，LR-值明显低于TB-Ab。T-SPOT. TB检测在敏感性、特异性上均显著优于TB-Ab。
, http://www.100md.com
3 讨论
T-SPOT. TB由ELISPOT发展而来[1]，是以RDI编码的ESAT-6和CFP-10作为T细胞特异性刺激源，应用ELISPOT技术检测外周血中MTB特异性释放γ-干扰素的T细胞而建立[2]。多项研究结果表明，T-SPOT. TB诊断结核病具有较高的敏感性和特异性[3-5]，试验结果不受机体CD4+T细胞数影响[6]，受患者免疫状态的影响较小[7]，与卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌无交叉免疫反应[8]，具有操作简单、周期短、敏感性和特异性高等优点，具有较高的临床应用价值。
本研究通过对74例疑似结核患者的前瞻性研究，评价T-SPOT. TB与TB-Ab诊断结核病的临床应用价值，结果显示T-SPOT. TB相比TB-Ab具有较好的敏感性和特异性，对结核疑似病例的鉴别诊断将具有极大帮助。
参考文献：
, http://www.100md.com 1 Czerkinsky CC， Nilsson LA， Nygren H， et al. A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells[J]. J Immonol Methods， 1983， 65(1-2)： 109-121.
2 Lalvani A， Brookes R， Hambleton S， et al. Rapid effector function in CD8+ memory T cells[J]. J Exp Med， 1997， 186： 859-865.
3 Hill PC， Brookes RH， Fox A， et a1. Large-scale evaluation of enzyme-1inked immunospot assay and skin test for diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection against a gradient of exposure in The Gambia[J].Clin Infeet Dis，2004，38：966-973.
, http://www.100md.com
4 Meier T， Eulenbruch HP， Wrighton-Smith P， et a1. Sensitivity of a new commercial enzyme—linked immunospot assay(T-SPOT.TB) for diagnosis of tuberculosis in clinical practice[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2005，24：529-536.
5 Lalvani A， Pareek M. Interferon gamma release assays： principles and practice[J]. Enferm Infecc Microbiol Clin，2010，28：245-252.
6 Cattamanchi A， Ssewenyana I， Davis JL， et a1.Role of interferon-gamma release assays in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in patients with advanced HIV infection[J]. BMC Infect Dis， 2010， 10： 75.
, 百拇医药
7 Kim SH， Song KH， Choi SJ， et a1. Diagnostic usefulness of a T-cell-based assay for extrapulmonary tuberculosis in immunocompmmised patients[J]. Am J Med， 2009， 122： 189-195.
8 Farhat M， Greenaway C， Pat M， el a1. False-positive tuberculin skin tests： what is the absolute effect of BCG and non-tuberculous mycobacteria？[J]. Int J Tubere Lung Dis， 2006， 10： 1192-1204., 百拇医药(李云峰 王建利 李国 陈武 黄柳桓 高江平 党玉)
关键词：结核；结核感染T细胞斑点试验；结核抗体试验
结核病的快速诊断是结核病防控工作中的一个难题，我国近年来结合感染率有上升趋势，结核抗体试验(TB-Ab)对于活动性结核的诊断价值低。结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT. TB)即γ干扰素释放试验是一种结核诊断的新方法，这种试验采用酶联免疫斑点方法定量检测外周血单核细胞在结核菌特异性抗原刺激下释放γ干扰素的水平，用于诊断潜伏性结核分枝杆菌感染以及结核病。本研究采用T-SPOT. TB和TB-Ab两种检测方法在疑似结核病人中进行对比研究，探讨二者在结核诊断中的敏感性和特异性。
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1 资料与方法
1.1 一般资料：2011年8月至2014年8月在我科住院疑似或待排结核患者74例，在其他详细检查基础上同时行T-SPOT. TB检测和TB-Ab检测。
1.2 方法：⑴T-SPOT. TB试验：根据T-SPOT. TB试剂盒(上海复兴医药股份有限公司)的说明书进行以下步骤：分离外周血单核细胞，与结核特异性抗原相对分子质量为6000的早期分泌抗原靶和相对分子质量为10000的培养滤液蛋白在抗γ-干扰素抗体预包被的板中共同孵育，37℃放置16-20小时。经碱性磷酸酶偶联的二抗和底物显色后用酶联免疫吸附试验自动读板仪(德国AID公司)对斑点进行计数，并按照说明书的判断标准进行结果判定。⑵TB-Ab试验：根据TB-Ab试剂盒(三明博峰生物科技有限公司)的说明，采用酶联免疫吸附试验检测患者血清中抗纯蛋白衍生物(PPD)抗体。⑶根据以下标准，将患者分为：a.结核性疾病，包括肯定结核性疾病：结核分枝杆菌培养阳性；疑似结核性疾病：结核分枝杆菌培养阴性，但临床表现、影像学或病理学检查支持结核，且抗结核治疗有效；b.非结核性疾病：临床表现明确系其他疾病所致，或者经其他治疗(非抗结核治疗)病情改善。⑷评价指标：采用敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、阳性似然比(LR+)和阴性似然比(LR-)等作为诊断试验的评价指标。
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1.3 统计学方法：检测结果以x±s表示，采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 T-SPOT. TB与TB-Ab阳性率比较：
74例患者同时行T-SPOT. TB检测和TB-Ab检测，T-SPOT. TB检测在结核性疾病的阳性率显著优于TB-Ab检测，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 T-SPOT. TB与TB-Ab评价指标比较：
T-SPOT. TB的敏感性、特异性、PPV、NPV等均显著高于TB-Ab(P<0.05)；T-SPOT. TB的LR+值明显高于TB-Ab，LR-值明显低于TB-Ab。T-SPOT. TB检测在敏感性、特异性上均显著优于TB-Ab。
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3 讨论
T-SPOT. TB由ELISPOT发展而来[1]，是以RDI编码的ESAT-6和CFP-10作为T细胞特异性刺激源，应用ELISPOT技术检测外周血中MTB特异性释放γ-干扰素的T细胞而建立[2]。多项研究结果表明，T-SPOT. TB诊断结核病具有较高的敏感性和特异性[3-5]，试验结果不受机体CD4+T细胞数影响[6]，受患者免疫状态的影响较小[7]，与卡介苗和绝大多数非结核分枝杆菌无交叉免疫反应[8]，具有操作简单、周期短、敏感性和特异性高等优点，具有较高的临床应用价值。
本研究通过对74例疑似结核患者的前瞻性研究，评价T-SPOT. TB与TB-Ab诊断结核病的临床应用价值，结果显示T-SPOT. TB相比TB-Ab具有较好的敏感性和特异性，对结核疑似病例的鉴别诊断将具有极大帮助。
参考文献：
, http://www.100md.com 1 Czerkinsky CC， Nilsson LA， Nygren H， et al. A solid-phase enzyme-linked immunospot (ELISPOT) assay for enumeration of specific antibody-secreting cells[J]. J Immonol Methods， 1983， 65(1-2)： 109-121.
2 Lalvani A， Brookes R， Hambleton S， et al. Rapid effector function in CD8+ memory T cells[J]. J Exp Med， 1997， 186： 859-865.
3 Hill PC， Brookes RH， Fox A， et a1. Large-scale evaluation of enzyme-1inked immunospot assay and skin test for diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection against a gradient of exposure in The Gambia[J].Clin Infeet Dis，2004，38：966-973.
, http://www.100md.com
4 Meier T， Eulenbruch HP， Wrighton-Smith P， et a1. Sensitivity of a new commercial enzyme—linked immunospot assay(T-SPOT.TB) for diagnosis of tuberculosis in clinical practice[J]. Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2005，24：529-536.
5 Lalvani A， Pareek M. Interferon gamma release assays： principles and practice[J]. Enferm Infecc Microbiol Clin，2010，28：245-252.
6 Cattamanchi A， Ssewenyana I， Davis JL， et a1.Role of interferon-gamma release assays in the diagnosis of pulmonary tuberculosis in patients with advanced HIV infection[J]. BMC Infect Dis， 2010， 10： 75.
, 百拇医药
7 Kim SH， Song KH， Choi SJ， et a1. Diagnostic usefulness of a T-cell-based assay for extrapulmonary tuberculosis in immunocompmmised patients[J]. Am J Med， 2009， 122： 189-195.
8 Farhat M， Greenaway C， Pat M， el a1. False-positive tuberculin skin tests： what is the absolute effect of BCG and non-tuberculous mycobacteria？[J]. Int J Tubere Lung Dis， 2006， 10： 1192-1204., 百拇医药(李云峰 王建利 李国 陈武 黄柳桓 高江平 党玉)