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编号:12603395
hepaCAM基因对结肠癌细胞增殖和周期的影响(2)
http://www.100md.com 2015年5月25日 延边医学 2015年第15期
     1.2.3Westernblot检测hepaCAM的蛋白表达。各组细胞用预冷的PBS洗3遍,加入预冷的RIPA裂解液,提取细胞总蛋白。测定蛋白浓度后,加入适量蛋白上样缓冲液,煮沸5min后于-80℃保存。SDS-PAGE凝胶电泳时每孔加入等量蛋白,转膜后用5%脱脂奶粉常温下封闭4h,一抗4℃过夜,洗膜后加入生物素标记的二抗,室温孵1h,最后化学发光法显色。

    1.2.4MTT检测各组Colo205细胞的增殖能力。将细胞分3组接种于96孔板中,每孔3000个细胞,接种首日细胞贴壁后用腺病毒处理实验组与空载组,导入基因,并将此设为第一个检测点,以后每24h检测一次,共连续检测5d。测定时每孔加入20μlMTT(5mg/ml),继续培养4h后弃去培养液,每孔再加入150μl的DMSO,于摇床上振荡10min,使蓝紫色结晶完全溶解。用酶联免疫检测仪在490nm处检测其吸光度D值,计算出各组的细胞抑制率,计算公式为:生存率(%)=某组某日所测得的平均吸光度D值/该组首日测得的平均吸光度D值×100% ......
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