1.2结核病参考血清和临床待检血清

    结核病参考血清和临床待检血清由贵阳疾病预防控制中心提供。 临床待检血清中 220 例为痰涂片染色镜检阳性、临床及 X 线诊断为肺结核的结核病人血清，其中男 148 例，女 72 例，年龄 14～78 岁。 30 例非结核呼吸疾病病人(肺炎、急慢性支气管炎、肺癌)血清由我院呼吸科提供。

    1.3方法

    1.3.1 PPD-ELISA 最佳反应条件的确立

    抗原 PPD 按 1∶400包被，即 42 μg / ml，放置 4℃过夜，取出洗涤 5 次，每次5 min 后，每孔加入 200 μl 1.0%BSA 封闭液，37℃封闭 1 h。血清样本用 PBST 按 1∶40 稀释，100 μl / 孔 ，37℃反 应 1 h后， 洗涤 5 次。 加入 1∶2000 稀释的 HRP 标记的羊抗人IgG100 μl / 孔，37℃反应 30 min，洗涤 5 次，最后拍干，每孔加入 DAB 底物液 100 μl， 室温避光反应 10 min， 最后加入50 μl 2 mol / L H2SO4终止反应， 用酶标仪在 490 nm 波长下测定 吸光度 A 值 。 PPD-ELISA 阴 阳界 限的确 定 ：PPD-ELISA 检测 80 份健康人群血清，计算样品 / 阴性(S / N)平均值为 1.55 ......