鹦鹉热嗜衣原体LAMP 检测方法的建立
 |
| 第1页 |
参见附件。
摘要: 目的 :为了快速准确的检测鹦鹉热嗜衣原体，建立针对Cps的LAMP检测方法。方法:照GeneBank公布的基因序列，在ompA基因保守区域设计4对引物，按照LAMP反应体系扩增1h，并分析该检测方法的敏感性、特异性以及对临床标本的检测效果。结果 :实验组经LAMP扩增后，肉眼可观察到扩增产物的出现，电泳后呈LAMP特征性梯状条带，对照组均无扩增产物；敏感性结果显示LAMP法测定Cps 6BC模板浓度灵敏度为10-7，相对于普通PCR (灵敏度为10-6)更高；特异性实验结果显示与对照组无交叉反应，具有特异性；LAMP法能准确的检测出临床阳性标本。结论: LAMP法能够直观快速的检测出Cps，且具有简便、敏感性高和特异性高等特点，是适合基层和现场检测而无需送至中心实验室的快速灵敏实用的分子生物学检测方法。
关键词: 鹦鹉热嗜衣原体; 环介导等温扩增技术；ompA基因
鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci, Cps)是专性胞内寄生的原核细胞型微生物，能感染多种禽鸟、哺乳动物[1]以及人类[1,2]。当前实验室检测方法包括血清学、分子生物学技术、细胞培养等。其中以PCR为代表的分子生物学技术具有快速准确、特异性高且敏感性强的特点，其中主要以衣原体外膜蛋白基因(ompA)作为目的基因[4]。但分子生物学方法需要较高的实验设备，其技术人员也需有较高专业要求。因此，建立特异、敏感、便捷及可应用于基层的检测方法具有重要的应用价值。环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP) 技术是Notomi等[5]报道的一种新型等温核酸扩增方法，在恒温条件下保温约60min，即可完成核酸扩增反应，且不需要反转录步骤，不需要PCR仪、且目前已成功用于多种病原体的检测[6]。故本研究拟采用LAMP法, 建立检测Cps的一种快速、实用、灵敏的检测技术。
1 材料和方法
1.1 主要实验试剂
Cps 6BC标准株、Ct、Cpn由南华大学病原生物学研究所保存。Cps阳性临床标本采集于衡阳市花鸟市场，并由南华大学病原生物学研究所鉴定并保存。所用引物采用Primer Explorer V4.0设计，由上海生工生物工程公司合成 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。