ZEB1、ZEB2及miR—200a在上皮性卵巢癌I期患者中的表达及临床意义(2)
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参见附件。
同法按配对原则抽取因子宫肌瘤切除子宫及双附件的病例设立空白组，入组者均无其他系统严重疾病，近一月无用药史。
1.2主要试剂
TRIzol试剂盒、real-time qPCR、ZEB1多克隆抗体、ZEB2多克隆抗体、免疫组化试剂盒及显色试剂盒。
1.3实验方法
miR-200a的测定：组 织 和 细 胞 总 RNA提 取 按TRIzol 说 明 书 进行。RNA 经1% 琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行质量控制及确定浓度。芯片杂交及数据处理由上海伯豪生物技术有限公司完成。每个标本取3 对 上皮性卵巢癌 及 其 癌 旁 组织， 抽 提 总RNA 并 在miRNA 芯 片 上 进 行 杂 交 反应。microRNA芯 片 检 测 实 验 对 于 分 子 表达 变 化 的 判 断 标 准 是 将 校 正 后 的卵巢 癌 样 品 与 癌旁正 常组织样品 间杂交信号 强度的比值(T/N)>2为上调，<0.5为下调。
ZEB1、ZEB2的测定：按试剂盒说明书操作。以磷酸盐缓冲液代替一抗作空白对照。切片常规脱蜡，PH9.0 EDTA微波炉加热修复抗原，3%双氧水37℃孵育15min灭活内源性过氧化物酶，正常山羊或兔血清工作液封闭30min，加ZEB1及ZEB2一抗(稀释度均为1：100)。4℃湿盒中过夜；复温1小时，加生物素化二抗37℃孵育30min，以辣根过氧化物酶标记链酶卵白素37℃孵育30min，加DAB显微镜下显色，苏木素复染细胞核，盐酸酒精分化，碳酸锂返蓝，梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。结果判定：ZEB-1和ZEB-2阳性结果判定：核阳性着色的肿瘤细胞和非间质细胞计为阳性细胞，按着色度积分：无0分，淡黄色为1分 ......
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