西维来司钠对大鼠脑出血后脑水肿的影响(1)
摘要:目的 探讨西维来司钠(sivelestat sodium)对胶原酶(collagenase)所诱导的大鼠脑出血(ICH)后脑水肿的影响。方法 将Wistar大鼠随机分为假手术对照组、ICH模型组、西维来司钠治疗组与尼莫地平治疗组。造模后4h、8h、12h、24h进行大鼠的行为学评分、脑组织病理观察、脑含水量(brain water content,BWC)以及脑伊文思兰(Evans Blue，EB)含量测定。 结果 与模型组比较，西维来司钠治疗组 ICH大鼠行为学评分显著降低、出血侧脑细胞的病理损伤减轻、BWC含量降低、EB含量降低。结论 西维来司钠对胶原酶所引起的大鼠ICH脑水肿具有较好的保护作用。
关键词 脑出血 脑水肿 西维来司钠
TheEffectofSivelestatonHydrocephalusafter Rats’ CerebralHemorrhage.Liu Quan, Dong Zhi, Wang Guang-zhen.Chongqing University of Medical Sciense,Chongqing 400016, China.
, 百拇医药
【Abstract】Objective To explore the effect of sivelestat on hydrocephalus after rat’s intracerebral hemorrhage(ICH) induced by collagenase.Methods to randomly divide Wistar rats into virtual operation group,ICH model group,sivelestatmedical treatment group and nimodipine medical treatment group.Molded for 4 hours,8h,12h and 24h,the rats are conducted behavioral scoring,pathological observation on cerebral tissues,measurement of brain water content (BWC) as well as Evans Blue(EB) content.Results compared with those in model group,the behavioral scores of ICH rats in sivelestatgroup significantly decreased, with pathological injuries of cerebral cells in ICH side lessened,BWC content and EB content reduced.Conclusion sivelestat plays a very important role in the protection of the hydrocephalus after rat’s ICH induced by collagenase.
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【Key Words】ICH;hydrocephalus;sivelestat sodium
西维来司钠(sivelestat sodium)是一个小分子多形核粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂，能可逆性且竞争性地抑制NE。临床研究证实，西维来司钠通过抑制中性粒细胞释放的弹性蛋白酶，改善伴有全身性炎症反应综合症(SIRS)的急性肺损伤(ALI)患者的呼吸功能。其主要机制可能是[1-3]:直接抑制NE的合成和释放，减少活化的中性粒细胞介导的肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤；降低肺血管内皮细胞的通透性，减少血栓调节素的释放，降低肺动脉压和肺的通透性；抑制人单核细胞的致炎症因子如IL-β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)的产生等。国外已有报道西维来司钠能够改善脑缺血/再灌注引起的脑水肿、脑损伤及炎症反应。本文拟观察西维来司钠对大鼠脑出血后脑水肿的影响，为其新的临床应用提供依据。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-250g，由重庆医科大学实验动物中心提供。术前12h禁食,自由饮水。
1.2 主要试剂和药品 Ⅶ型胶原酶(美国Sigma公司),水合氯醛(苏州正兴化工厂), 西维来司钠(Sivelestat sodium,重庆医药工业研究院, 分子式 C20H21N2O7Na.4H2O), 尼莫地平(Nimodipine, 山东泰安制药厂)。
1.3 主要仪器 立体定位仪(西北光学仪器厂),微量注射器(上海保西玻璃仪器厂), 恒温干燥箱(重庆实验仪器厂), 电子分析天平(Sartorius,German), 显微镜 H-2(日本OLYMPUS)。
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2 方法
2.1 实验动物分组 动物随机分成五个组即：假手术组(sham)；ICH+生理盐水组(model)；ICH+ Sivelestat300mg/kg组(S1)；ICH+Sivelestat150mg/kg组(S2)；ICH+Sivelestat75mg/kg组(S3)；ICH+Nimodipine0.5mg/kg组(nimodipine)。每组又分为4h,8h,12h,24h四个时间点亚组。生理盐水、sivelestat和nimodipine于ICH造模前30min经大鼠尾静脉给药，每日一次，缓慢注射，药液总量控制在1 ml/200g体重；生理盐水也按1 ml/200g体重给予。每组Wistar大鼠7只。
2.2 大鼠ICH模型的建立 参照Rosenberg等[4]报道的方法，操作步骤如下：实验鼠经水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后，仰卧位固定于立体定位仪上，于前囟后1 mm，中线向左旁开3 mm处用五号针头钻一直径大约为0.5mm的小孔，深达硬脑膜。用固定于立体定位仪上的微量注射器沿钻孔进针，进针深度为5.8 mm(即尾状核位置)，缓慢注射胶原酶Ⅶ0.5U(用生理盐水配制成1U/μl)。注射时间为3min，注射完后留针5min再退针，然后缝合皮肤，回笼饲养。假手术组插针后注射0.5μl的生理盐水,其余操作一样。
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2.3 观察指标
2.3.1 神经病学评分 动物苏醒后，各组均参照Bederson等[5]的神经缺损分级评分标准立即进行神经功能缺失评分，3分及以上动物入选本实验。标准如下： 无任何症状或仅有同侧眼裂缩小为0级评0分; 提尾时对侧肢体屈曲内收为Ⅰ级评1分；抗侧方推力减弱并伴有Ⅰ级症状为Ⅱ级评2分；爬行时向对侧划圈并伴有Ⅱ级症状为Ⅲ级评3分；意识丧失不能行走为Ⅳ级评4分。术后动物分笼饲养，正常进食进水，室温控制在20-25℃。以后于造模后4h、8h、12h、24h进行评分。
2.3.2 脑BWC测定 各组动物在预定的时间点，经水合氯醛麻醉后，迅速断头取脑，将取出的脑组织放在已经用生理盐水湿润过的滤纸上，以防止水分蒸发。去除软脑膜和血迹，以进针孔为中心，切取出血侧前半部脑组织相同部位的皮层和基底节，精密称重(精确到0.1mg)。取脑到称完重量时间控制在5min内。然后置于95℃恒温烘箱24h，再称取干重。按Blliot公式计算脑含水量：BWC=(湿重-干重)/湿重×100%。, http://www.100md.com(刘 全 董 志 王光珍)
关键词 脑出血 脑水肿 西维来司钠
TheEffectofSivelestatonHydrocephalusafter Rats’ CerebralHemorrhage.Liu Quan, Dong Zhi, Wang Guang-zhen.Chongqing University of Medical Sciense,Chongqing 400016, China.
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【Abstract】Objective To explore the effect of sivelestat on hydrocephalus after rat’s intracerebral hemorrhage(ICH) induced by collagenase.Methods to randomly divide Wistar rats into virtual operation group,ICH model group,sivelestatmedical treatment group and nimodipine medical treatment group.Molded for 4 hours,8h,12h and 24h,the rats are conducted behavioral scoring,pathological observation on cerebral tissues,measurement of brain water content (BWC) as well as Evans Blue(EB) content.Results compared with those in model group,the behavioral scores of ICH rats in sivelestatgroup significantly decreased, with pathological injuries of cerebral cells in ICH side lessened,BWC content and EB content reduced.Conclusion sivelestat plays a very important role in the protection of the hydrocephalus after rat’s ICH induced by collagenase.
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【Key Words】ICH;hydrocephalus;sivelestat sodium
西维来司钠(sivelestat sodium)是一个小分子多形核粒细胞弹性蛋白酶(NE)抑制剂，能可逆性且竞争性地抑制NE。临床研究证实，西维来司钠通过抑制中性粒细胞释放的弹性蛋白酶，改善伴有全身性炎症反应综合症(SIRS)的急性肺损伤(ALI)患者的呼吸功能。其主要机制可能是[1-3]:直接抑制NE的合成和释放，减少活化的中性粒细胞介导的肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤；降低肺血管内皮细胞的通透性，减少血栓调节素的释放，降低肺动脉压和肺的通透性；抑制人单核细胞的致炎症因子如IL-β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)的产生等。国外已有报道西维来司钠能够改善脑缺血/再灌注引起的脑水肿、脑损伤及炎症反应。本文拟观察西维来司钠对大鼠脑出血后脑水肿的影响，为其新的临床应用提供依据。
1 材料和方法
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1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-250g，由重庆医科大学实验动物中心提供。术前12h禁食,自由饮水。
1.2 主要试剂和药品 Ⅶ型胶原酶(美国Sigma公司),水合氯醛(苏州正兴化工厂), 西维来司钠(Sivelestat sodium,重庆医药工业研究院, 分子式 C20H21N2O7Na.4H2O), 尼莫地平(Nimodipine, 山东泰安制药厂)。
1.3 主要仪器 立体定位仪(西北光学仪器厂),微量注射器(上海保西玻璃仪器厂), 恒温干燥箱(重庆实验仪器厂), 电子分析天平(Sartorius,German), 显微镜 H-2(日本OLYMPUS)。
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2 方法
2.1 实验动物分组 动物随机分成五个组即：假手术组(sham)；ICH+生理盐水组(model)；ICH+ Sivelestat300mg/kg组(S1)；ICH+Sivelestat150mg/kg组(S2)；ICH+Sivelestat75mg/kg组(S3)；ICH+Nimodipine0.5mg/kg组(nimodipine)。每组又分为4h,8h,12h,24h四个时间点亚组。生理盐水、sivelestat和nimodipine于ICH造模前30min经大鼠尾静脉给药，每日一次，缓慢注射，药液总量控制在1 ml/200g体重；生理盐水也按1 ml/200g体重给予。每组Wistar大鼠7只。
2.2 大鼠ICH模型的建立 参照Rosenberg等[4]报道的方法，操作步骤如下：实验鼠经水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后，仰卧位固定于立体定位仪上，于前囟后1 mm，中线向左旁开3 mm处用五号针头钻一直径大约为0.5mm的小孔，深达硬脑膜。用固定于立体定位仪上的微量注射器沿钻孔进针，进针深度为5.8 mm(即尾状核位置)，缓慢注射胶原酶Ⅶ0.5U(用生理盐水配制成1U/μl)。注射时间为3min，注射完后留针5min再退针，然后缝合皮肤，回笼饲养。假手术组插针后注射0.5μl的生理盐水,其余操作一样。
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2.3 观察指标
2.3.1 神经病学评分 动物苏醒后，各组均参照Bederson等[5]的神经缺损分级评分标准立即进行神经功能缺失评分，3分及以上动物入选本实验。标准如下： 无任何症状或仅有同侧眼裂缩小为0级评0分; 提尾时对侧肢体屈曲内收为Ⅰ级评1分；抗侧方推力减弱并伴有Ⅰ级症状为Ⅱ级评2分；爬行时向对侧划圈并伴有Ⅱ级症状为Ⅲ级评3分；意识丧失不能行走为Ⅳ级评4分。术后动物分笼饲养，正常进食进水，室温控制在20-25℃。以后于造模后4h、8h、12h、24h进行评分。
2.3.2 脑BWC测定 各组动物在预定的时间点，经水合氯醛麻醉后，迅速断头取脑，将取出的脑组织放在已经用生理盐水湿润过的滤纸上，以防止水分蒸发。去除软脑膜和血迹，以进针孔为中心，切取出血侧前半部脑组织相同部位的皮层和基底节，精密称重(精确到0.1mg)。取脑到称完重量时间控制在5min内。然后置于95℃恒温烘箱24h，再称取干重。按Blliot公式计算脑含水量：BWC=(湿重-干重)/湿重×100%。, http://www.100md.com(刘 全 董 志 王光珍)